摘要：目的:综述国内外关于慢性血栓栓塞性肺动脉高压(chronic thromboembolism pulmonary hypertension,CTEPH)实验动物模型构建技术的研究概况。方法:应用计算机检索PubMed数据库2006/2009相关文章,检索词为"model of pulmonary thromboembolism"。同时计算机检索中国期刊全文数据库2003/2009相关文章,检索词为"肺动脉栓塞,实验"。此外还手工查阅相关专著数部。纳入标准:①文章所述内容应与CTEPH实验研究相关,包括慢性血栓栓塞性肺动脉高压流行病学,不同实验动物及不同制备方式。②同一领域选择近期发表或在权威杂志上发表的文章。排除标准:①重复研究。②Meta分析。结果与结论:目前用于CTEPH模型制备的实验动物主要有犬、猪和鼠等。很多研究者都尝试模仿深静脉血栓形成后,多次急性肺栓塞事件所导致的CTEPH形成机制,建立CTEPH验动物模型。建立犬CTEPH模型主要有反复自体血凝块注入法及陶瓷念珠输入法,可用于CTEPH病理生理特点、数字剪影检查、解剖研究以及肺动脉内膜剥脱手术和介入治疗等干预治疗血栓栓塞性肺动脉高压的研究与影像学诊断技术的研究。建立猪CTEPH模型主要采用体外注入栓子法,可用于影像技术诊断CTEPH研究。建立鼠CTEPH模型主要采用反复自体血凝块注入法与肺动脉结扎法,可用于CTEPH病理生理及诊断方面研究。目前对CTEPH的研究主要是使用犬、猪和鼠实验动物模型,各有优缺点,在具体的实验研究中需根据实验目的和设计选择适当的实验动物及制作方法,以便取得最佳的实验结果。

摘要：背景：已经证实应用维甲酸和双丁酰环磷酸腺苷作为诱导剂,可以在体外建立胚胎干细胞分化为平滑肌细胞的模型。目的：尝试应用维甲酸和双丁酰环磷酸腺苷诱导犬骨髓间充质干细胞向血管平滑肌样细胞分化,评价其作为血管壁种子细胞的可行性。设计、时间及地点：随机对照,体外诱导细胞学实验,于2006-05/2007-12在北京协和医院胸心外科实验室和桂林医学院附属医院中心实验室完成。材料：成年杂种犬10只,雌雄不拘,用于取骨髓。方法：骨髓穿刺法获取犬骨髓,密度梯度离心和贴壁生长的方式提取单个核细胞;取第2-4代细胞,用含维甲酸和双丁酰环磷酸腺苷的培养液诱导、分化为血管平滑肌样细胞。主要观察指标：相差倒置显微镜观察细胞形态学;免疫荧光显微镜观察β肌动蛋白的表达;电镜观察细胞超微结构的改变。结果：骨髓间充质干细胞经苷诱导2周后细胞融合成片形成峰谷样外观,β肌动蛋白呈阳性表达。透射电镜显示胞浆内可见肌丝形成,表现出比较原始的血管平滑肌细胞的特点。结论：维甲酸和双丁酰环磷酸腺苷可诱导骨髓间充质干细胞在体外定向分化为具有平滑肌细胞特性的细胞,将其作为构建组织工程化血管的种子细胞是可行的。

摘要：背景：骨髓间充质干细胞具有自我复制的能力、多向分化和增殖的潜能，但骨髓中间充质干细胞的含量极少，因此体外纯化和扩增极其重要。目的：拟建立体外体分离培养、纯化骨髓间充质干细胞的方法，观察其增殖及生长特性。设计、时间及地点：单一样本观察实验，于2006—05／2007—12在北京协和医院胸心外科实验室和桂林医学院刚属医院中心实验室完成。材料：骨髓血来源于成人肋骨骨髓。方法：收集成几骨髓血，采用密度为1．077的Ficoll淋巴细胞分离液提取成体人骨髓单个核细胞，根据骨髓间充质干细胞易于贴壁的特性除去未贴壁细胞获取骨髓间充质干细胞。取第2～3代细胞在-80℃条件下冻存，24h后复苏，观察活细胞数，按2×10^3／cm。种值扩增，扩增时保持细胞密度为2×10^3/cm^2～8×10^3/cm^2。主要观察指标：倒置显微镜和相差倒置显微镜观察细胞形态变化，流式细胞仪检测细胞抗原表达，采用细胞计数方法绘制原代培养和传代培养细胞生长曲线。结果：原代培养接种三四小时后细胞开始贴壁，24h后贴壁细胞数量明显增多，3d后贴壁细胞为单个或几个细胞克隆，散在分布，大部分细胞呈纺锤形。7-9d后集落迅速增多细胞融合，细胞数量约增加了10倍；10～12d，细胞数量增加了约20倍，铺满了全层，细胞排列也有一定的方向性，呈旋涡样生长，旋涡中心细胞呈多层分布。骨髓间充质干细胞表达KDR、CD105，不表达CD34、CD45、CD11a、CD14、HLADR等。原代细胞培养曲线显示，第2-6天为生长潜伏期，第8～10天进入对数增长期，第12-14天进入个平台期；传代培养的潜伏期为24～48h，对数增长期为4-6d，细胞的增殖、生长逐渐缓慢，接种后8到9天进入平台期。结论：利用密度悌度离心和贴壁的方法获取的骨髓间充质干细胞具有大量增殖的能力，表达CD105、KDR，不表达HLA—DR、CD34、CD45、CD11a、CD14。