摘要：根据已发表的鹅源副黏病毒(GPMV)NA-1株F基因序列设计2对引物,引物中含有突变位点,分3次扩增F基因片段,从而得到目的基因片段,再利用酶切位点将基因片段与转座载体pFastBac 1连接,获得重组质粒,命名为pFastBac 1-F′,从而使改造后的F′基因编码的氨基酸裂解位点为112Gly-Arg-Gln-Gly-Arg-Leu117。并将pFastBac 1-F′进行测序鉴定后转化到DH10Bac宿主菌,将目的基因定向插入到Bacmid质粒中,经筛选获得的重组Bacmid F′转染Sf 9昆虫细胞,并进行表达检测。结果,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot检测获得蛋白特异条带,相当分子量约63 kD。

摘要：将本实验室保存的NA-1株鹅源副黏病毒(GPMV)经SPF鸡胚增殖,收集尿囊液进行病毒纯化,提取病毒基因组RNA。参考GenBank已收录的ZJ1株GPMV基因组序列,设计了4对特异性引物,利用RT-PCR法分别特异性的扩增出病毒NP、P和L基因片段,并将目的基因片段消化、回收纯化,克隆pCI-neo表达载体,转化大肠杆菌DH5α,小提质粒选取阳性克隆酶切、PCR鉴定并进行序列测定,结果表明NP、P和L基因正确克隆到pCI-neo表达载体中,并分别命名为pCI-NP、pCI-P和pCI-L。将构建好的pCI-NP、pCI-P和pCI-L重组质粒单独转染Vero细胞,在荧光显微镜下观察到特异绿色荧光,表明NP、P和L蛋白得到成功表达。

摘要：根据鹅细小病毒(GPV)B株全基因序列,设计并合成了1对特异性引物,采用PCR技术对GPVGD-01株的VP3基因进行扩增,将目的基因克隆到pGEM○R-T后测序,分析了GPV GD-01株VP3基因的遗传变异情况,并进行原核表达。结果表明,GPV GD-01株VP3基因全长1605bp,编码534个氨基酸(DQ665790),与已发表的GPV、番鸭细小病毒(MDPV)的核苷酸、氨基酸同源性分别为96.15%、80.1%,97.78%、89.13%,说明GPV VP3基因具有较高的遗传稳定性。结合亲水性、表面极性、抗原位点分析比较GPV、MDPV VP3基因,为研究GPV和MDPV感染谱差异的分子机制提供了一定的理论基础。原核表达显示,VP3蛋白的最高表达量占整个菌体蛋白含量的29.9%,经表达条件优化可产生大量可溶性VP3表达蛋白。SDS-PAGE与Western-blot分析显示,表达的VP3蛋白的相对分子质量约60000,并能与鼠抗GPV阳性血清反应,证明具有一定的反应原性,为进一步研制基因工程疫苗及诊断制品奠定了基础。

摘要：将本实验室分离保存的NA-1株鹅副粘病毒（GPMV）经SPF鸡胚增殖，收集鸡胚尿囊液进行病毒纯化，提取病毒基因组RNA。参考GenBank已收录的GPMV ZJ1株基因组序列，设计了8对特异性引物，RT—PCR法分别特异性的扩增出病毒各基因片段，并将各目的基因片段回收纯化．克隆PGEMT载体．转化大肠杆菌DH5α，小提质粒选取阳性克隆酶切鉴定并进行序列测定．对测定结果进行拼接得到全长cDNA序列（GenBank登录号：DQ659677）。NA-1株核苷酸比新城疫病毒（NDV）核苷酸多6个碱基，位于1644～1645nt之间，符合NDV核苷酸“六碱基原则”。序列分析结果表明，GPMVNA-1株与各地代表株核苷酸同源性81．2％～91．3％。同时根据各毒株F基因开放阅读框前389个核苷酸序列绘制出系统发育进化树，结果表明GPMNNA-1株与SFO2和QY97病毒株同属于基因Ⅶ型，不同于基因Ⅸ型NDV的国家标准株F48E9和基因Ⅱ型的LaSota传统弱毒株。

摘要：D?丙氨酸是L?丙氨酸的手性分子,在细菌个体中参与细胞壁肽聚糖和磷壁酸等的构成以及孢子的出芽和呼吸代谢等过程;在细菌群落中,D?丙氨酸参与生物膜的形成与调节。D?丙氨酸在细菌中的功能和代谢存在特异性,其代谢通路中的酶和基因可作为药物的靶向位点。本文对D?丙氨酸的合成,在细菌中的代谢及功能等方面的作用进行综述,探讨D?丙氨酸与变异链球菌致病性的关系,以期为抗龋药物候选靶向位点提供理论基础。通过现有研究结果表明,D?丙氨酸代谢过程中的酶及相关基因在对变异链球菌的生长及生物膜形成具有重要作用,有望作为靶点设计抗龋药物。

摘要：植物群落斑块化是天然放牧草地最基本的特征之一.为探索植物群落斑块化对土壤微生物群落组成及多样性的影响,本研究以宁夏荒漠草原为研究对象,采用磷脂脂肪酸(PLFA)法对比分析了不同植物群落微斑块内土壤微生物生物量和群落结构特征的变化.结果表明:1) 4种植物群落微斑块内土壤微生物种类丰富,且都表现为细菌含量最高,真菌和放线菌含量较少,革兰氏阳性菌含量高于革兰氏阴性菌;2) 4种植物群落中,甘草微斑块的土壤微生物总量显著高于猪毛蒿、苦豆子和黄芪;3)冗余分析表明,磷脂脂肪酸总量、革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌、厌氧菌、真菌/细菌均与土壤有机碳呈显著正相关,与pH呈显著负相关,表明土壤有机碳、pH是荒漠草原土壤微生物生长和发育的重要影响因素.