摘要：【目的】高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis)6ww6是一株根际耐盐促生菌,可以作为微生物肥料的优选菌种。为了加强菌种知识产权保护,建立菌株快速检测方法。【方法】本研究通过基因组比对分析、TBLASTn检索、NR库检索验证并剔除有其他同源的结果序列,最终得到菌株6ww6的孤儿基因,设计引物进行PCR鉴定。【结果】筛选出5个特异性基因J939_13195、J9319_05960、J9319_13355、J9319_05965和J9319_13350。引物5960F和5960R可以单一性扩增出菌株6ww6的目的基因J9319_05960,确定其为菌株6ww6的特异性分子标识。【结论】本研究确定了菌株6ww6的唯一性身份编码,建立了以比较基因组学和孤儿基因为基础的菌株水平上的鉴定方法。该方法具有快速、精确、能鉴定到菌株水平的优点,对于有价值微生物的知识产权保护提供了有力的抓手。

摘要：近年来,基于高通量测序技术对植物根际土壤微生物菌群结构的测定结果表明,土壤中绝大多数微生物难以通过传统的富营养培养基实现培养和分离。为进一步探索分离土壤中寡营养微生物的方法,结合多种培养因素,以土壤浸出液为基础培养基设计寡营养培养基分离土壤细菌菌株。并通过菌株的细胞形态、生理生化特征、16S rRNA和gyrB基因序列等对其中一株菌进行鉴定,同时对其蛋白酶与铁载体的产生能力进行检测以评价其在植物根际促生方面的应用潜力。利用土壤浸出液做培养基是有效分离土壤寡营养细菌的方法 ;编号为S35的菌株鉴定为嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia),具有蛋白酶和铁载体产生能力。采用的寡营养培养基可以分离获得在富营养培养基上不易分离的细菌,得到S. maltophilia S35菌株在植物促生方面具有一定的应用潜力。

摘要：通过对我院生物工程专业本科生的2项PGPR实验,对不同培养基对实验效果的影响进行了初步研究。实验证明,采用不同的培养基,对实验效率和实验效果影响很大;科学合理的选择培养基,能够提高实验结果的准确性和可靠性,可以大幅度地缩短实验时间,提高实验效率,通过本实验的进行达到了引导学生开阔思路,科学合理地设计试验方案,提高综合实验能力的目的。

摘要：利用梯度稀释和对峙试验的方法,从向日葵根际土壤筛选到18株对向日葵菌核病病原菌—核盘菌(Sclerotiniasclerotiorum)有拮抗效果的细菌,其中1株具有较强的拮抗效果,命名为XRK4。经过形态观察及16S rDNA序列分析,将XRK4鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。研究表明XRK4具有β-1,3-1,4-葡聚糖酶活性。设计引物以XRK4的基因组DNA为模板扩增得到长度为732 bp的β-1,3-1,4-葡聚糖酶的完整基因,其开放阅读框架编码243个氨基酸。XRK4可能因产生葡聚糖酶,降解病原菌细胞壁而具有拮抗活性。

摘要：本试验在温室盆栽条件下研究阴沟肠杆菌JP6菌株对烟株生长及植烟土壤养分、酶活和细菌群落多样性的影响。试验设计两个处理:对照组每株施用5 mL培养基,处理组每株施用5 mL JP6液体菌剂。研究结果显示:与对照相比,施用JP6菌株30 d的烟株株高极显著增加23.89%,最大叶表面积显著增加13.63%;施用JP6菌株60 d的烟株株高显著增加8.55%;采收后,JP6处理的茎和叶全氮、全磷含量显著增加;与对照相比,JP6处理的土壤中全氮、速效钾减少7.69%和12.77%;有效磷和有机质含量分别提高3.45%、11.95%;土壤过氧化氢酶、蔗糖酶、中性磷酸酶、酸性磷酸酶活性分别增加21.15%、39.25%、23.9%、15.2%。Illumina MiSeq高通量测序分析发现,施用JP6菌株影响了土壤细菌群落多样性,施用JP6和对照的烟株根际土壤中细菌种类分别为4297±92和4420±179个OTUs;施用JP6的烟株根际土壤中可比对出的特有细菌有17种,CK特有的细菌有5种;与对照相比,JP6的根际土壤中有11个与解磷相关的菌属相对丰度高于CK,其中固氮菌属(Azotobacter)、微小杆菌属(Exiguobacterium)为JP6组特有。研究表明,阴沟肠杆菌JP6菌株对烟株的生长具有促进作用,同时也能够改变土壤酶活性,引起根际土壤细菌菌群结构的变化,提高解磷/溶磷菌属的相对丰度。对JP6菌株在农业上的实际应用具有指导意义。

摘要：根据已知非核糖体肽合成抗生素操纵子的保守序列设计引物,从对棉花立枯病有很好拮抗作用的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)MH25菌株中克隆相关操纵子。获得了枯草芽孢杆菌MH25的一个非核糖体肽合成抗生素操纵子序列,其包括4个ORF(ORF1,ORF2,ORF3,ORF4),与枯草芽孢杆菌RB14的ituD,ituA,tiuB和ituC的同源性分别为99%,98.70%,98.99%和99.48%,4个ORF编码的氨基酸序列与ItuD,ItuA,ItuB,ItuC的相似性分别为98%,98.54%,98.69%和98%。然后将4个ORF分别进行结构域分析,ORF3的14 779～14 963序列与ituB相对应区域的相似性为86.24%。该操纵子的启动子区为TATACACA-16bp-TAGGAT,与σA-10和-3(5 TTGACA-17bp-TATAAAT)不同。枯草芽孢杆菌MH25的Iturin A操纵子序列已在GenBank中注册,登陆号为EU263005。

摘要：应用单因素设计法对影响内生枯草芽孢杆菌NS178发酵液菌落数的因子进行筛选,得到3个主要影响因子,分别为葡萄糖、(NH4)2SO4、K2HPO4。采用Box-Behnken Design法对发酵培养基进行优化,通过响应面法分析获得最佳配方为葡萄糖2.29%、(NH4)2SO40.3%、K2HPO40.23%。对温度、初始p H值、装液量3组培养条件进行优化,最佳条件为33°C、p H 7.6、50 m L。在最佳配方和培养条件下,NS178发酵液菌落数为34.50×108cfu/m L;培养72 h时芽孢率达到75.8%;优化后比优化前发酵液抑菌圈直径增加67%。