摘要：背景：目前国内对上皮细胞的研究多采用细胞株的方式,但其离体时间长,细胞易产生变异,而原代培养则与体内状态更相近,希望能为组织工程肾脏相关研究提供肾上皮细胞来源。目的：探索原代肾上皮细胞培养的条件和方法。建立一套高效快捷的原代肾上皮细胞培养方案。设计、时间及地点：单一样本观察,开放性实验,于2007-12/2008-03在武汉大学病毒学国家重点实验室分子病毒与癌研究室完成。材料：新生2~4dSPF级雄性SD大鼠鼠婴12只。方法：取SD大鼠,切取双侧肾脏组织,将其反复剪成约1mm×1mm×1mm块,加入2.5g/L的胰酶和0.4g/L乙二胺四乙酸,放入37℃恒温水浴箱消化,30min后移至200目钢网过滤,去除未消化组织块和细胞团,收集网下悬液1000r/min低温离心5min,用DMEM（pH7.2）培养基制成细胞悬液,以4×108L-1密度接种于培养瓶中,置CO2培养箱中培养。再将细胞悬液接种到一个培养瓶内,静止培养30min,镜下观察细胞部分贴壁,将培养液连同尚未贴壁细胞一起吸到另一瓶内,继续培养,重复上述操作一次,纯化肾上皮细胞。主要观察指标：以4×108L-1密度接种于培养瓶中培养。用4g/L锥虫蓝染色检测肾上皮细胞的存活率,不着色者为存活细胞。并观察肾上皮细胞的形态学变化、贴壁率。结果：肾上皮细胞存活率为95.20%,4h约60%的细胞贴壁,12h85%以上的细胞已经贴壁。24h后肾上皮细胞伸出伪足呈梭形、多角形,具有胞核一两个,细胞大小均匀,生长迅速,三四天后形成细胞簇,最后肾上皮细胞连接成片生长。结论：该肾上皮细胞培养方法存活率、贴壁率高,是一种可靠的肾上皮细胞培养方法。

摘要：背景:从目前文献报道来看,精原干细胞分离效率较高且较为公认的方法是通过隐睾模型结合表面标志进行多参数筛选。目的:探讨α6-integrin和c-kit作为分离筛选精原干细胞特异性表面标志的可行性。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-05/12在武汉大学人民医院完成。材料:6周龄雄性昆明白小鼠40只,随机分为隐睾组、正常对照组,20只/组。方法:隐睾组小鼠建立隐睾模型,麻醉后腹部正中切口,将两侧睾丸拉入腹腔,将脂肪垫靠近附睾处各缝一针,分别固定在侧腹壁。正常对照组小鼠不进行任何干预。造模后两三个月,采用传统的两步消化法获取生精上皮单细胞悬液,加入FITC标记的抗α6-integrin抗体和PE标记的抗c-kit抗体,利用流式细胞仪进行α6-integrin+和c-kit-双重筛选,锥虫蓝染色监测细胞活性。主要观察指标:隐睾的形态学变化,精原干细胞分选结果。结果:隐睾小鼠的生精小管内细胞排列紊乱,层次及管腔消失,小管中央可见分裂相细胞,细胞数明显减少。与正常对照组比较,隐睾组sidescatterlow、Forwardscatterhi区的睾丸细胞增多,图形向左上移位。α6-integrin+和c-kit-细胞分布存在明显的相互偏离,即α6-integrin+细胞绝大多数不是精原干细胞,c-kit-细胞绝大多数也不是精原干细胞。从隐睾组筛选出具有sidescatterlow、α6-integrin+、c-kit-特征的细胞数占睾丸细胞总数的2.8%,此即为精原干细胞,锥虫蓝监测结果显示细胞活性达95%以上。结论:采用α6-integrin和c-kit这两种表面标志进行精原干细胞的筛选,尽管可以提高细胞悬液中的精原干细胞纯度,但均缺乏特异性。

摘要：背景:睾丸移植是短时间热缺血损伤后快速进入冷缺血的过程冷缺血时间的长短对睾丸生精功能是否存在影响目前还缺乏明确证据。目的:模拟临床睾丸移植缺血再灌注兔模型探索睾丸移植冷缺血时间与睾丸缺血再灌注损伤的相关性。设计、时间及地点:分组设计对比观察于2006-05/12在武汉大学人民医院动物实验中心完成。材料:雄性3～6月龄大白兔体质量2.5～3.5kg方法:采用自行设计的模拟临床睾丸移植过程的冷缺血灌注模型对20只大白兔左侧的睾丸采用0～4℃高渗枸橼酸腺嘌呤液恒压灌注并浸泡于0～4℃生理盐水中低温保存于冷缺血后1246h开放左侧睾丸血流。术后24h取双侧睾丸以右侧睾丸作自身对照。主要观察指标:苏木精-伊红染色及Johnsen评分判断睾丸损伤程度。丙二醛检测试剂盒检测每克睾丸组织中丙二醛含量。TUNEL法检测睾丸凋亡指数。结果:冷缺血1h后可见睾丸生精上皮结构稍紊乱2h后生精上皮开始脱落管腔内精子数量减少4h后生精上皮明显变薄仅见少量的精子细胞6h后生精上皮仅可见少量精母细胞部分呈唯Sertoli细胞表现。随冷缺血时间的延长睾丸缺血再灌注损伤逐渐加重Johnsen评分分值逐渐下降。睾丸组织冷缺血2h后再灌注24h的丙二醛水平明显高于自身对照组(P<0.05)至4h达到最高。凋亡细胞数量随冷缺血时间的延长逐渐增多凋亡指数高于自身对照(P<0.05)。结论:冷缺血后4h再灌注会造成睾丸生精上皮的严重损害提示睾丸移植前冷缺血时间应当控制在4h以内。

摘要：目的:了解当前湖北省急诊脓毒症诊治现状及急诊医务人员对脓毒症的认知情况。方法:采用德尔菲法并依据脓毒症指南与专家共识自行设计的急诊脓毒症现状调查问卷,对华中地区共17个地级市、自治州或省直辖县级行政单位的79家医院急诊科150名医生的脓毒症诊治现状进行了调查。结果:急诊医务人员对中国预防脓毒症行动(PSCC)的知晓率仅有39.3%,脓毒症Hour-1 bundle的知晓率为53.3%。Hour-1 bundle中血培养依从性最低,仅有45.3%,大部分人认为不能实施的原因是急诊条件有限。急诊医务人员认为影响脓毒症诊治效果最主要的原因是早期识别能力有限,诊断不及时(34.0%),更愿意通过专家讲座来学习脓毒症的知识。结论:建议加强急诊脓毒症患者筛查、诊断与管理的培训,提高脓毒症患者早期识别率,通过对围脓毒症期患者的合理诊治,降低脓毒症的病死率。

摘要：目的:评价沉浸式团队学习在临床教学能力培训的应用效果。方法:研究对象为参加统一标准化设计的临床教学能力培训的师资,进行课前和课后自评及课程反馈。结果:研究对象共249名。课前自评中,场景设置、课程设计和评估反馈三方面较薄弱。31-40岁组、非手术类临床科室组、中高级职称组和≤3年教学经验组的培训效果最佳。师资对课程的满意度均不低于90%。结论:对年轻师资进行早期系统全面的培训,能获得更好的能力提升。沉浸式团队学习应用于临床教学能力师资培训,取得了较好的满意度和培训效果,值得尝试。

摘要：目的：观察在心肺复苏（CPR）培训中应用心肺复苏实时反馈系统对培训效果的影响。方法：采用对照研究的方法,169名临床医学本科生按培训方式不同取分为,视频指导结合讲解培训A组（84人）和应用心肺复苏反馈系统＋视频指导结合讲解培训B组（85人）。两组均利用高级复苏模型,进行心肺复苏培训。培训后,对两组人员进行理论和操作考试。理论测试评分标准均依据2015年心肺复苏指南更新版,自行设计,经急诊医学专家反复修改而成。操作考试由心肺复苏反馈系统根据胸外按压的有效率系统评分生成,达到深度5~6cm为按压有效。A组人员在心肺复苏反馈系统的监测下（背对电脑显示器）,实施胸外心脏按压2min;B组人员面对反馈系统的显示屏进行2min的胸外按压。电脑系统记录以上心脏按压平均速率（次/min）、平均深度（cm）、胸廓回弹速率（chest compression release velocity,CCRV）（centi-inches/second）参数,并对两组人员主观疲劳程度的评估,进行数据统计分析。结果：应用反馈系统前后,理论成绩分别为（90.19±6.51）vs.（90.53±6.28）,两组比较差异无统计学意义。平均有效胸外按压率分别为（25.33±26.76）%vs.（77.23±17.18）%;按压深度分别为（4.85±0.76）cm vs.（5.52±0.29）cm。按压深度不够以及按压深度过度的百分比均显著低于应用前（47.62%vs.10.59%）、（14.29%vs.1.18%）;平均按压频率分别为（102.25±6.83）次/min vs.（118.29±9.76）次/min;平均按回弹速率分别为（1 425.839±215.48）centi-inches vs.（1 582.637±134.82）centi-inches/second,差异均有统计学意义（P〈0.01）。在应用反馈系统前后,两组间主观疲劳程度评分无显著差异[（13.1±2.1）vs.（13.5±1.5）]。结论：在心肺复苏培训中加强CPR质量参数的监测与实施实时反馈系统能有效提高心肺复苏培训的效果,改善心肺复苏培训中胸外按压的质量。

摘要：目的评估团队学习在住院医师临床思维训练中的应用效果。方法研究对象为住院医师,临床思维训练课程是以团队学习方法为主,基于临床真实病例标准化设计的小班教学。课程评价包括课前和课后的临床思维自评,以及课程反馈评价。结果研究共纳入106名住院医师。临床思维的课前自评整体较低(25.5%~31.1%),但课后有明显提升(50.9%~63.2%),且一年级的提升效果较二年级明显,但二年级的课程讨论投入和贡献高于一年级。课程整体满意度较高(94.3%)。结论团队学习在住院医师临床思维训练中的满意度较高,能有效提升住院医师的临床思维综合能力,且一年级的学习效果优于二年级,因此,应尽早开展对住院医师的规范化临床思维训练。