摘要：目的　探索细菌荧光酶的融合luxAB基因作为新的报告基因在肝癌细胞中表达的可行性。方法　基于PCR的位点突变技术 ,构建了含有细菌荧光酶融合AB基因的哺乳动物表达载体pcDNA3 luxAB ,通过脂质体转染 ,使其在肝癌细胞BEL740 2中稳定表达。以序列测定和PCR分别确定融合luxAB基因构建的正确性和质粒转染的成功。以MTT和生物发光法分别测定细胞群体生长曲线和细菌荧光酶发光强度。结果　构建的融合luxAB基因是单顺反子 ,与设计完全一致 ;pcDNA3 luxAB的转染对BEL740 2肝癌细胞的群体生长无显著影响 ;表达载体在BEL740 2细胞中可稳定表达 ,在细胞水平可检测到 (8.71± 1.2 1)mV/ 40 μg蛋白的细菌荧光酶发光强度。

摘要：目的利用DNA芯片快速检测结核分枝杆菌耐乙胺丁醇embB基因突变。方法根据结核分枝杆菌embB基因序列设计探针并制作DNA芯片,根据结核从分枝杆菌embB基因突变的热点片段设计引物,该片段用TAMRA荧光标记PCR扩增增后与DNA芯片杂交,同时以PCR—SSCP和DNA测序法为对照。结果120株结核分枝杆菌临床分离株中,35株敏感株DNA芯片杂交结果与标准株完全相同；85株耐乙胺丁醇临床分离株中有50株检测到embB基因突变[58．8％(50／85)],均为306位密码子突变,该突变与PCR-SSCP和测序结果完全一致；85株耐药株中后有35株未检测到突变,占41．2％(35／85)。结论用DNA芯片可快速、特异地检测出大多数结核分枝杆菌耐乙胺丁醇分离株的embB基因突变,可协助临床医生制定合理的治疗方案,特别是复治患者,可帮助选择有效药物。

摘要：　　我们比较了结核分枝杆菌(结核菌)基因组DNA及其聚合酶链反应(PCR)产物的灵敏度与特异性，并对结核病人痰标本进行了检测。　　一、材料和方法　　1.菌种来源：24种分枝杆菌来自中国药品生物制品检定所，11种非分枝杆菌来自中国科学院微生物学研究所。　　2.标本收集：90份痰标本来自本院结核科住院病人，经X线检查、临床表现确诊。30份非结核病人痰标本来自本院呼吸科、肿瘤科及北京大学第三医院呼吸科住院病人。　　3.标本DNA提取：采用本室研制的标本前处理试剂盒。　　4.引物：引物a：根据文献［1］报道设计。扩增产物为350 bp，5′-GAAGTCGTAACAAGC，5′-CAAGGCATCCACCAT；引物b：根据引物a扩增产物测序结果，选择碱基差异性设计，扩增产物为250 bp，5′-CGGCAGCGTATCCATTGATG，5′-CACGAAAACGCCCCAACTG。　　***扩增：引物a扩增参数：94℃，1 min；45℃，3 min；72℃，1 min；循环30次，最后72℃延伸10 min。引物b扩增参数：94℃，1 min；61℃，1 min；72℃，1 min；循环30次，最后72℃延伸10 min。扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下观察结果。