摘要：以A型流感病毒NP基因为靶标,设计并合成了3对编码发夹状siRNA寡聚核苷酸。将合成的序列互补的寡聚核苷酸退火形成双链,克隆至pSilencer 1.0-U6载体中,并转化DH5a菌株,氨苄抗性筛选阳性菌落,扩大培养后,提取质粒进行酶切鉴定,并进行测序分析。结果显示,酶切后得到预期长度的DNA片段;插入序列插入的位置与设计完全一致,无碱基缺失或突变。表明A型流感病毒NP基因小干涉RNA表达载体构建成功。

摘要：从广东省棠下、增城等地区猪场送检病料中,分离到9株葡萄球菌,经TH-16S细菌生化编码系统鉴定表明,其中4株松鼠葡萄球菌,3株木糖葡萄球菌,2株猪葡萄球菌。参考Genebank中登录的基因序列,设计合成可区分4种猪葡萄球菌表皮脱落毒素ExhA、ExhB、ExhC、ExhD的引物,并以此引物对2株猪葡萄球菌和其余7株葡萄球菌进行了PCR检测,结果表明1株为ExhB型,1株为无毒力型,其余7株葡萄球菌均不能产生表皮脱落毒素,用此9株葡萄球菌回归动物后证实,ExhB毒力型的猪葡萄球菌致病力强,很快死亡;无毒力型的猪葡萄球菌无致病力;4株松鼠葡萄球菌都有不同程度的致病性;3株木糖葡萄球菌无致病力,说明猪渗出性皮炎的发生与猪葡萄球菌所产生的表皮脱落毒素有关。

摘要：参考GenBank中的MDPVFM株和GPVB株全基因序列 ,设计并合成一对引物 ,分别对MDPVGD株和GPVGD株的结构蛋白基因 (VP1)进行PCR扩增 ,并克隆到pMD18_T载体 ,筛选到重组质粒并测序。通过对MDPVGD株和GPVGD株的VP1基因的核苷酸序列分析 ,这两种病毒VP1基因大小均为 2 199bp ,核苷酸序列同源性为 87% ,而位于VP1基因上的VP2至VP3基因起始密码子之间的核苷酸序列的差异较大 ,同源性仅为 6 4 %。另外对MDPVGD株和GPVGD株与各地方毒株的VP1和VP3基因核苷酸序列的同源性比较 。

摘要：【目的】研究野猪源与家猪源猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syn-drome virus,PRRSV）陕西分离株的遗传变异情况及分子生物学特征。【方法】根据VR-2332和HB-1（sh）/2002毒株序列设计引物,对2株PRRSV陕西分离毒株Shaanxi-1（家猪源）、Shaanxi-2（野猪源）全基因分段进行扩增并测序,将测序结果依次拼接得到病毒的全基因,然后进行序列的比对分析。【结果】PRRSV Shaanxi-1、Shaanxi-2毒株高度同源且均属于美洲型毒株,它们与2006年以前分离的毒株相比存在明显差异（与BJ-4株的核苷酸同源性仅为89%）,而与高致病性PRRSV（HP-PRRSV）保持较高的同源性（相似率为99%左右）。Shaanxi-1、Shaanxi-2分别呈现不同的变异特点,Shaanxi-1 ORF3、ORF5基因变异较大,ORF6、ORF7较为保守;Shaanxi-2 ORF7基因变异最大,ORF3~ORF6较为保守。分析发现,Shaanxi-1、Shaanxi-2具有HP-PRRSV的分子特征,但部分位点氨基酸的突变明显区别于HP-PRRSV。【结论】不同来源的Shaanxi-1、Shaanxi-2毒株均属于HP-PRRSV演化中的一个分支,但其发生了部分变异,使其具备了新的特点。

摘要：根据Genbank中PCV2全基因组序列设计了扩增片段大小为262bp的引物P1/P2,建立了检测猪圆环病毒2型PCR方法。引物对P1/P2从PCV2阳性病毒感染基因组中扩增出特异性条带的最低DNA含量为10-9ng/mL(约100个PCV2病毒)。用该方法对陕西和甘肃的103份临床发病猪的肺脏和淋巴结样品进行检测,结果有68份样品检测出阳性,阳性率为66%。

摘要：本研究参照已发表的IBV基因序列设计合成了一对引物,经反转录-聚合酶链式反应(Reverse Transcription-polymerase Chin Reaction,RT-PCR)技术扩增得到我国地方分离株LX4 mRNA_5和mRNA_6的全部cDNA大小约1.7kb的片段。将该片段克隆并进行序列测定,与国内外部分参考毒株的相应序列比较分析发现:LX4 5a基因与已发表的国内外IBV毒株之间同源性很低,而这些参考毒株间5a基因同源性却很高(推导的氨基酸同源性在90％以上)。5b基因与国内分离株D971同源性最高。在所选的12株参考毒株中,LX4 N基因推导氨基酸同源性与国内分离株SD/97/02最高(94％),与HB次之(93％),与其他毒株核苷酸和推导氨基酸同源性在89％和92％以下。对已报道的N基因所编码蛋白的三个保守碱性区同源性比较发现,LX4在第66-88位与Beau、M41、H52及FIB同源性均为100％。在第181-234位,推导氨基酸同源性与SD/97/02最高(94％)。在第334-373位推导氨基酸同源性与H120和ZJ971推导氨基酸同源性均为93％,与其他毒株在82％以下。同时还发现在c末端350-409位,LX4与H120推导氨基酸的同源性为100％,与HB次之(98％),与其他毒株在95％以下。以上研究结果提示:我国地方分离毒株LX4 mRNA_5和mRNA_6 cDNA序列与国内其他分离株最高,表明与国内其他分离株具有较近的?

摘要：为了建立适用于本地区小反刍兽疫病毒的分子生物学快速检测方法,通过分析NCBI数据库中小反刍兽疫病毒N基因序列,根据该基因设计特异性引物,建立针对本地区小反刍兽疫病毒N基因的一步法RT-PCR检测方法,利用该方法对来自疫源地的不同病料样本进行检测,结果显示该方法对病料的可选择性较多,对检测到的阳性条带通过测序分析,发现流行毒株与陕西毒株基因型差异不明显。该检测方法的建立有利于开展小反刍兽疫疫情监测,为有效防控小反刍兽疫提供技术支撑。

摘要：通过比对分析NCBI数据库中新城疫病毒(NDV)不同毒株V蛋白基因序列,设计2对引物,并优化试验条件,建立一种快速鉴别NDV强弱毒株的RT-PCR诊断方法。结果显示,用2对引物对NDV强毒可扩增出703 bp和456 bp的特异性片段,而对NDV弱毒只能扩增出703 bp的特异性片段;特异性试验结果表明该方法对IBDV、IBV和ILTV的检测均为阴性;灵敏性试验结果显示,该方法对NDV强弱毒株最小RNA检出量为均为0.01 ng/μL,敏感性高于当前通用检测引物。所建方法具有高灵敏性、强特异性、准确快速等优点,可用于临床新城疫强弱毒的快速检测及新城疫的监测。

摘要：将2007年1月河南省某猪场送检的疑似高热病病料处理后接种于Marc-145细胞，出现细胞聚集、固缩、脱落等特异性细胞病变。根据GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的基因序列设计并合成针对NSP2、ORF3和ORF5基因的引物，RT-PCR扩增目的基因并将其克隆入pMD18-T载体进行测序。并与国内外已发表的毒株的序列进行比较。结果表明：分离毒株Henan-1是美洲型PRRSV，而且NSP2基因发生30个AA的不连续缺失；Henan-1的NSP2、ORF3和ORF5基因与JXA1、JX0612、HZ-X、HB-1（sh）、CH-1a、HB-2（sh）、SP、ATCC VR-2332、Henan-HN1、Resp PRRS／Repro MLV、PA8、BJ-4等毒株等位基因的核苷酸同源性分别为83．0％～99．0%、88．3％～99．2％、88．6％～99．5％，推导的氨基酸同源性分别为66．7％～97．9％、84．7％～98．8％、87．1％～99．5％；而ORF3和ORF5基因与LV4．2．1等位基因核苷酸同源性分别为64．7％和64．2％，推导的氨基酸同源性分别为56．7％和61．0％。基因系统发育树分析表明：Henan-1与JXA1、JX0612株的亲缘关系很近，与HB-1（sh）亲缘关系较近，与HZ-X、CH-1a、HB-2（sh）、SP、RespPRRS／Repro MLV等毒株处于不同的分支。

摘要：根据禽流感病毒(AIV)的M基因序列设计合成了1对AIVM基因的通用诊断引物AMDI／AMD2,针对H5N1、H9N2两种亚型的HA基因分型设计合成了2对分型诊断引物H15D1／H5D2,H9D1／H9D2。采用一步法多重RT-PcR技术建立了一种禽流感病毒快速分型诊断方法,并对其特异性和灵敏度进行验证。结果表明,该诊断方法速度快,一般只需要28～30 h即可鉴定出结果,比病毒分离鉴定(5～7 d)至少缩短4～6 d;特异性强,试验组53株AIV全部扩增出与预期同样长度的目的条带,与病毒分离及血清学鉴定方法的检测结果完全一致。对照组中新城疫病毒(NDV)、减蛋综合征病毒(EDS76V)、传染性支气管炎病毒(IBV)均未扩增出特异性基因条带,;灵敏度高,试验组将AIV接种SPF鸡胚,培养后的鸡胚尿囊液(AAF)进行10-2稀释后,仍可以检测到其中的AIV。