摘要：目的探讨干扰Sema4D基因的表达对胰腺癌细胞生物学的影响。方法设计合成Sema4D-siRNA,转染到人胰腺癌细胞系中,将实验分为3组,转染siRNA组、阴性对照组(即转染非特异性对照组)﹑空白对照组(未经任何处理的胰腺癌细胞)。转染48 h后利用RT-q PCR检测转染前后Sema4D mRNA表达的变化,转染72 h后利用Western-Blot的方法检测转染前后Sema4D蛋白表达的变化;采用四甲基偶氮唑蓝显色法观察转染后细胞生长变化;Transwell小室侵袭试验检测转染后肿瘤细胞侵袭性的改变;采用流式细胞技术检测肿瘤细胞凋亡的变化。计量资料多组间比较采用单因素方差分析比较,进一步两两比较采用LSD-t检验法。结果转染Sema4D-siRNA 48 h后,转染siRNA组Sema4D mRNA的表达明显低于阴性对照组和空白对照组,3组比较差异有统计学意义(F=421.990,P<0.001)。转染Sema4D-siRNA 72 h后,转染siRNA组Sema4D蛋白明显低于阴性对照组和空白对照组,3组间比较差异有统计学意义(F=27.074,P=0.002 3)。转染siRNA组48、72、96 h的细胞生长速度明显低于阴性对照组和空白对照组,3组间比较差异均有统计学意义(F值分别为15.314、62.255、223.493,P值分别为0.004、<0.001、<0.001)。转染siRNA组穿膜细胞个数明显低于阴性对照组和空白对照组,3组间比较差异有统计学意义(42.0±5.9 vs 60.0±6.1 vs 61.0±4.6,F=37.21,P=0.000 4]。转染siRNA组穿膜细胞凋亡率明显低于阴性对照组和空白对照组,3组间比较差异有统计学意义[(16.57±0.31)%vs(9.50±0.45)%vs(9.90±0.61)%,F=26.75,P=0.007 4]。结论 siRNA能够下调Sema4D基因在胰腺细胞中的表达,可以抑制胰腺癌细胞增殖,使胰腺癌细胞侵袭能力明显下降,凋亡率下降。

摘要：目的探讨siRNA沉默轴突诱导因子4D(Sema4D)对人胰腺癌细胞增殖、迁移及血管生成的影响。方法设计合成Sema4D-siRNA,转染至人胰腺癌细胞系中,瞬时转染48 h后利用反转录-聚合酶链反应检测转染前后Sema4D mRNA表达的变化;瞬时转染72 h后利用Western blot法检测转染前后Sema4D蛋白表达的变化;采用四甲基偶氮唑蓝显色法观察转染后细胞生长变化;Transwell迁移实验、划痕修复实验检测转染后人胰腺癌细胞迁移性的改变;小管形成实验观察转染后人胰腺癌细胞培养上清液对血管形成能力的影响。结果转染siRNA后,人胰腺癌细胞中Sema4D mRNA和Sema4D蛋白表达、胰腺癌细胞的生长速度均较阴性对照组和空白对照组下降(P<0.05);Transwell迁移实验和划痕修复实验显示,胰腺癌细胞穿膜细胞数和划痕修复率显著低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05);小管形成实验显示,转染siRNA组、阴性对照组和空白对照组血管形成数目分别为0.50±0.02、1.45±0.60、1.37±0.52,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Sema4D-siRNA能够在胰腺癌细胞中引发RNA干扰效应,下调Sema4D基因表达,抑制胰腺癌细胞增殖,使胰腺癌细胞迁移能力明显下降,抑制血管生成。