摘要：本文设计了一套数据驱动的学习辅助系统设计与开发,该系统包括了Web端和移动端,系统围绕学生学习数据,为学生学习服务,以智能群组组建算法帮助学生找到互补型学习伙伴,以较丰富的移动端功能辅助学生开展协作学习,组织线下学习活动,随时随地进行“约学”。

摘要：目的构建靶向犬p53基因慢病毒干扰载体,建立稳定沉默p53基因的WRD/p53-细胞系。方法设计并构建4条针对犬p53基因的特异性shRNA干扰质粒。将构建的慢病毒表达载体(p GMLV-p53)和包装质粒(packaging mix)组成的包装系统共转染293T细胞,包装病毒,收集病毒原液,超滤浓缩,并测定滴度。包装好的慢病毒感染WRD细胞,Western blot和实时荧光定量PCR方法检测不同靶点RNA干扰载体对p53基因的干扰效果,确定有效靶点。针对有效靶点慢病毒颗粒以最适感染复数(multiplicity of infection,MOI)感染WRD细胞,puromycin抗生素筛选稳定感染细胞系WRD/p53-。结果结果显示p53 RNAi慢病毒载体构建成功,成功包装四种不同靶点的p53基因RNA干扰慢病毒,病毒滴度均达到1×109TU/ml。四种干扰载体慢病毒均具有较好的干扰效果,选用沉默效果最好的p GMLV-p53A1为最优靶点,成功建立p53 RNAi慢病毒载体稳定感染细胞系WRD/p53-。结论成功构建p53 RNAi慢病毒载体,并有效干扰WRD细胞中p53 mRNA和蛋白表达,同时成功筛选并建立p53RNAi慢病毒稳定感染WRD/p53-细胞系。

摘要：目的构建沉默信息调节因子1（sirtl）过表达慢病毒载体，观察其在体外培养的视网膜神经节细胞（RGC）中的表达。方法构建大鼠sirtl cDNA的过表达慢病毒载体，采用PCR鉴定其是否构建成功。同时将其与OenBank 上 sirtl cDNA标准序列进行对比分析。将鉴定后的慢病毒重组表达质粒pLV5 sirtl与包装质粒共转染293T细胞，制备携带siftl的慢病毒pLV5-sirtl。体外培养Sprague-Dawley大鼠的RGC，应用pLV5-sirtI感染细胞设为sirtl过表达慢病毒组，同时设未感染组和空载体感染组。采用荧光显微镜观察细胞感染效率，实时PCR和蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测sirtlmRNA和蛋白表达水平。结果PCR鉴定结果显示，在1680碱基对处有扩增条带，表达的DNA条带与sirtl目的片段大小一致。与GenBank上sirtlcDNA标准序列进行对比分析，测序结果显示其含有与设计相同的靶序列。荧光显微镜观察发现，空载体感染组和sirtl过表达慢病毒组均可看到绿色荧光，感染效率在90％以上。实时PCR检测结果显示，sirtl过表达慢病毒组sirtlmRNA表达水平较未感染组、空载体感染组均明显升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。Westernblot检测结果显示，sirtl过表达慢病毒组sirtl蛋白表达水平较未感染组、空载体感染组均明显升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论成功构建的大鼠sirtl过表达慢病毒载体能够在体外有效感染大鼠RGC，提高sirtl在RGC中的表达水平。