摘要：在电子商务系统中,网站优化是改进网站设计和布局、方便用户访问站点、实现为客户个性化服务的重要手段,而Web挖掘是实现网站优化的关键技术。本文通过对Web数据的分析挖掘,提出实现确定回溯点和目标页的算法。实践证明,该算法可以有效地实现网站优化。

摘要：以鸡的FASN基因序列为参照,通过设计和合成引物扩增出鸽的FASN基因片段,应用基因工程技术通过与pMD18-T载体重组,转化***5α感受态细胞,蓝白斑法和PCR法双重鉴定筛选出阳性克隆,进行测序,并将测定的序列与genebank中的鸡FASN基因序列进行比对,结果表明,扩增、测定的鸽FASN基因序列片段长1281bp,GC含量42.00%,AT含量58.00%.测序片段为鸽FASN基因序列的最后一个内含子片段.鸽序列与基因库中家鸡同源序列的保守性为60.52%,比鸡同源序列少154个碱基.

摘要："人物专访"是记者针对一些新闻内容或者社会热门话题对专门的人物进行采访,寻求被采访人对此的解释和看法。人物专访中最为重要的就是和被采访人的沟通,尤其是向被采访人提出有效的问题。这需要采访者在开展专访工作前进行精心的准备和设计,酝酿好问题后采取一定的技巧将问题提出来。本文就针对专访提问中需要运用到的技巧进行研究。

摘要：目的构建P75特异小干扰RNA(siRNA)表达载体,并观察其对神经生长因子(NGF)促乳腺癌细胞生长及凋亡的影响。方法通过GenBank提供的P75mRNA序列,设计3对能转录短发夹状RNA的DNA序列,构建pSilencerTM4.1-CMV neo质粒重组载体,转染乳腺癌SKBR3细胞;通过实时荧光定量PCR和Western blot筛选RNA干扰效果最强的干扰片段;以此干扰片段转染至乳腺癌SKBR3细胞,利用G418筛选稳定表达P75-siRNA的SKBR3细胞株,命名为P75-siRNA;MTT检测P75干扰后NGF对细胞增殖作用的影响;流式细胞术检测细胞凋亡;建立荷乳腺癌小鼠模型,观察P75干扰后对小鼠肿瘤生长和凋亡相关蛋白表达的影响。结果序列测定表明成功构建P75-siRNA表达载体,实时荧光定量PCR和Western blot检测结果显示P75mRNA和蛋白表达下调,尤以P752-siRNA干扰片段效果显著;MTT检测显示,NGF能刺激细胞增殖,与NGF组相比,P75-siRNA干扰后细胞增殖率均明显增高(P<0.05);与空白对照组相比,NGF+P75-siRNA组和NGF组的细胞凋亡率明显降低(P<0.05),NGF+P75-siRNA组更为明显;荷乳腺瘤小鼠中,P75-siRNA组小鼠的肿瘤生长明显超过未转染组和空载体转染组(P<0.05),且P75-siRNA组Caspase-3表达下降,Bcl-2表达增加,Bax表达下降(P<0.05)。结论P75特异干扰表达载体能有效降低P75的表达,增强NGF促乳腺癌SKBR3细胞的增殖作用和抗凋亡作用,从而使肿瘤生长更为明显。

摘要：目的：探讨病毒巨噬细胞炎性蛋白Ⅱ（v MIP-Ⅱ）对乳腺癌细胞CXCR4表达的影响及分子机制。方法：设计并合成扩增CXCR4核心启动子基因序列,构建荧光素酶报告载体,酶切鉴定;通过检测报告基因荧光素酶活性反映病毒巨噬细胞炎性蛋白N端21肽（NT21MP）对CXCR4启动子的作用;通过荧光定量PCR技术和Western blot检测CXCR4干扰或过表达、HER-2干扰,以及miRNAs抑制剂和类似物转染后相关基因及miRNAs表达;采用磺酰罗丹明B（SRB）染色法检测细胞增殖活性,PI染色法检测细胞周期,Annexin V/PI染色法检测细胞凋亡。结果：NT21MP下调CXCR4的表达,并上调miR-125b、miR-135a和miR-146a的表达（P〈0.05~P〈0.01）;NT21MP降低CXCR4核心启动子的活性;SP1为CXCR4核心启动子高频结合转录因子,miR-135a可下调SP1的表达（P〈0.01）;过表达CXCR4上调HER-2表达（P〈0.01）,而干扰CXCR4表达则下调HER-2表达（P〈0.01）;miR-125b可下调HER-2的表达（P〈0.01）;HER-2表达下调诱导miR-146a的表达;miR-146a抑制CXCR4表达（P〈0.01）;相对于空白对照组,miR-146a和miR-135a均可抑制细胞增殖,阻断细胞周期,并诱导凋亡（P〈0.01）。结论：NT21MP通过诱导miR-125b、miR-135a和miR-146a负调控CXCR4的表达,从而抑制乳腺癌细胞的增殖能力,为NT21MP应用于乳腺癌患者的治疗提供了理论基础。