摘要：【目的】制备鸡E3泛素连接酶FBXL8多克隆抗体,探究鸡源FBXL8对A亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup A,ALV-A)在鸡胚成纤维细胞(DF-1)内复制的影响。【方法】以DF-1细胞cDNA为模板,通过PCR扩增FBXL 8基因,构建鸡源FBXL8原核表达重组质粒pET-28a-FBXL8,将其转化大肠杆菌表达菌株RIL进行诱导表达及纯化,将表达产物His-FBXL8免疫10月龄新西兰大白兔制备多克隆抗体,利用Western blotting和间接ELISA分别检测抗体特异性及效价;针对已公布的FBXL 8基因序列设计过表达引物及靶向FBXL 8基因的干扰序列,构建过表达质粒psi-flag-FBXL8及干扰质粒pLKO.1-FBXL8-shRNA,使用Western blotting检测其表达效果。将构建成功的过表达质粒和干扰质粒转染DF-1细胞,24 h后感染ALV-A,通过半定量PCR、Western blotting分别检测ALV-A的结构蛋白P27、GP85表达水平。【结果】PCR成功扩增出大小为1182 bp的FBXL 8基因片段,并成功构建FBXL8原核表达重组质粒pET-28a-FBXL8,诱导表达的融合蛋白His-FBXL8大小为43 ku。Western blotting和间接ELISA结果显示,制备的FBXL8兔多克隆抗体可特异性识别外源蛋白,且抗体效价为1∶64000。成功构建了FBXL8过表达质粒和干扰质粒,其在DF-1细胞中能够实现对FBXL8的过表达和敲低。半定量PCR和Western blotting检测结果显示,过表达FBXL8可抑制ALV-A复制,而敲低FBXL8则促进其复制。【结论】本研究制备的FBXL8多克隆抗体具有良好特异性及反应性;在DF-1细胞中,FBXL8负向调控ALV-A复制,研究结果为进一步深入探究FBXL8生物学特性提供了重要参考,并为揭示FBXL8抗ALV-A感染分子机制奠定了基础。

摘要：非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染猪所引起的一种急性、出血性、高度接触性传染病。自2018年ASF传入我国以来,已经流行了5年多,病毒已经演化出了低毒力的基因Ⅱ型和基因Ⅰ型弱毒株,以及基因Ⅱ型和Ⅰ型重组毒株,这为该病的防制和疫苗研发带来了巨大挑战。ASF减毒活疫苗(live attenuated vaccines,LAVs)能够诱导良好的免疫保护,具备商品化疫苗的潜力。鉴定和研究毒力相关基因(virulence-associated genes,VAGs)对于LAVs的研发至关重要,也是ASFV研究的热点和难点。因此,对已鉴定的ASFV VAGs进行全面系统的综述,总结VAGs编码蛋白的作用机制,同时展望如何全面鉴定ASFV VAGs及其编码蛋白的作用机制,以及如何利用已知的VAGs科学设计安全高效的LAVs,以期为ASFV的致病机制及LAVs研发提供参考。

摘要：在当前教育环境下,国家发展需要大量的应用型技术人才,这对类型教育下的职业教育来说,无疑是一个蓬勃发展的大好时机。但随着社会的不断发展,职业教育原有课程内容体系的弊端日益暴露出来,与时代需求不符。文章基于类型教育理念,对中职“服装结构设计”工作过程本位的课程内容进行研究,分析了当前课程体系存在的问题,并结合社会职业需求,对重构课程内容的策略进行研究,以期提高中职服装专业学生的实践能力和职业素养。

摘要：对国内外的口袋袋型进行研究,分析不同年龄段口袋的廓形和款式,且进行分类介绍。如:不同口袋用在不同服装上给人呈现的感觉以及我们日常常见的插袋、挖袋、贴袋和复合型口袋的应用;研究探讨了通过二次设计、加法和减法以及夸张的一些廓形对口袋局部的再设计等,在保证功能性的前提下不乏装饰性,以丰富服装本身,表达服装的设计理念,也是穿着者表达自己的一种途径,展现人们的审美观念,从而更好地表达服装的内在美。

摘要：本文对近10年涉及竞技健美操项目体能训练理论及其相关文献进行研究,来设计竞技健美操体能训练模型,并对体能训练中一般体能训练之核心力量训练对竞技健美操的影响进行分析,从而为提高竞技健美操竞技能力和运动成绩提供理论依据。

摘要：【目的】环指蛋白185(ring finger protein 185,RNF185)是Ring家族E3泛素连接酶的一员。试验旨在探明鸡源RNF185对A亚群禽白血病病毒(Avian leukemia virus subgroup A,ALV-A)体外复制的影响,为进一步研究鸡源RNF185对ALV-A致病性的影响和介导的致瘤机制提供参考。【方法】参考GenBank中已公布的鸡RNF185基因(登录号:NP_001007841)序列分别设计RNF185过表达引物和RNF185单链shRNA,通过PCR扩增RNF185基因及合成双链shRNA,将其分别克隆至真核表达载体psi-flag和干扰载体pLKO.1-GFP,并使用PCR、双酶切和测序等方法验证重组质粒。使用Western blotting验证重组质粒的表达和干扰效果,并使用CCK-8试剂盒检测重组质粒对DF-1细胞活性的影响。在RNF185过表达和干扰后的DF-1细胞中分别接种10~4半数组织感染剂量(TCID)ALV-A(rHB2015012)病毒液,于接种完成后3、4和5 d收取细胞,并使用Western blotting检测ALV-A的病毒载量。【结果】PCR成功扩增出RNF185基因,单链shRNA经退火后形成双链shRNA,并成功构建重组质粒psi-flag-RNF185、pLKO.1-RNF185-1和pLKO.1-RNF185-2。Western blotting结果表明,构建的过表达和干扰质粒能够在DF-1细胞中稳定表达和干扰RNF185。CCK-8结果表明,过表达和干扰RNF185不影响DF-1细胞的活性。RNF185过表达可以促进ALV-A在DF-1细胞中的复制,干扰RNF185表达可以抑制ALV-A在DF-1细胞中的复制。【结论】本研究构建了可以在DF-1细胞中高效表达和干扰RNF185的过表达质粒和干扰质粒,RNF185对DF-1细胞增殖无明显影响,能够促进ALV-A(rHB2015012)在体外的复制。

摘要：瘦素受体(leptin receptor, LEPR)为Ⅰ型细胞因子受体家族的单一跨膜信号转导复合物,是瘦素(leptin, LEP)参与调控乳腺上皮细胞生长和凋亡的重要中介物质。信号转导及转录激活蛋白-5a(signal transducer and activator of transcription-5a, STAT5a)介导大约90%的妊娠期乳腺上皮乳蛋白的合成。为了解LEP对牦牛乳腺上皮细胞(mammary epithelial cells, MECs)中LEPR和STAT5a表达的作用特点及催乳素(prolactin, PRL)对LEP的功能发挥可能产生的影响,试验设计有、无PRL(500μg/L)刺激时,不同质量浓度LEP(0,50,100,200,400,800μg/L)作用牦牛MECs 48 h,通过RT-qPCR检测不同质量浓度LEP对牦牛MECs STAT5a mRNA表达水平的影响,Western blot技术检测STAT5a及LEPR蛋白的表达特点。结果显示,随着LEP作用质量浓度的升高,STAT5a mRNA的相对表达水平呈现先上升后降低的趋势,当LEP质量浓度为200μg/L时,其相对表达水平最高(P<0.05)。无PRL存在时,LEPR蛋白表达水平随LEP质量浓度的增大逐渐降低;而当LEP质量浓度为100,200μg/L时,对STAT5a的蛋白水平表现出显著抑制作用(P<0.05)。而有PRL存在时,LEP质量浓度为200μg/L时,LEPR蛋白相对表达量达到最高;而STAT5a在LEP质量浓度为100,200μg/L时蛋白表达水平较高(P<0.05)。LEP在有、无PRL参与下,对LEPR、STAT5a的表达有不同的影响,可能是因为有PRL存在时,结合受体引起相关机制反应,进而导致蛋白表达有差异。

摘要：【目的】探明鸡源环指蛋白165(ring finger protein 165,RNF165)在A亚群禽白血病病毒(ALV-A)复制中的作用,为进一步研究鸡源RNF165对ALV-A致病性的影响提供参考。【方法】将ALV-A接种于DF-1细胞和1日龄雏鸡,通过Western blotting和实时荧光定量PCR方法分别从体外和体内两个方面验证ALV-A对宿主RNF165表达的影响;参考已公布的RNF165基因序列设计过表达引物,通过PCR扩增RNF165基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1;将验证表达的重组质粒转染DF-1细胞,1 d后接种ALV-A,使用Western blotting检测过表达RNF165对病毒复制的影响;最后设计突变引物,构建RNF165功能结构域突变质粒,将过表达质粒和突变质粒分别转染DF-1细胞,1 d后接种ALV-A,Western blotting测定gp85蛋白表达差异。【结果】ALV-A感染DF-1细胞后未能检测到内源性的RNF165蛋白,但基因转录水平较对照组明显下调(P<0.01)。在体内试验中,与对照组相比,感染病毒雏鸡肝脏中RNF165基因和蛋白表达水平均有所下调(P<0.01);通过PCR成功扩增到大小为1068 bp的目的片段并成功克隆至pcDNA3.1,Western blotting结果显示,在39 ku处出现目的条带,RNF165过表达后促进了病毒复制;测序结果显示,成功构建出功能结构域突变质粒,与过表达质粒组相比,RNF165突变质粒组病毒的复制水平受到显著抑制。【结论】ALV-A感染抑制DF-1细胞和雏鸡肝脏RNF165的表达,在体外试验中,过表达RNF165会促进ALV-A的复制,且这种影响与其保守结构域有关。

摘要：现代母亲节源于美国，时间是每年五月的第二个周日。对于惯打感情牌的商家而言，以母亲节为契机拉近与消费者的关系并非难事，但要从泛泛之辈中脱颖而出并不容易。今年的母亲节，两个品牌的创意再次温暖人心，一个是虚拟招聘广告的病毒视频，另一个是宝洁公司维护多年的系列品牌形象广告。

摘要：为研究2.5D Cf/SiC复合材料的磨削工艺性能,设计并完成了单因素试验.结果表明:磨削深度a p、砂轮线速度v s及进给速度v w均对2.5D Cf/SiC的磨削性能评价参数(表面形貌、表面粗糙度及磨削力)产生影响,其中磨削深度对评价参数的影响最大,进给速度影响最小;经向纤维及纬向纤维的支撑效果具有很大差异,导致不同的磨削加工缺陷形式;2.5D Cf/SiC的主要缺陷形式包括界面脱粘、裂纹、纤维露头及拔除;不同加工参数及纤维方向会导致磨屑出现一定的差异.根据试验结果对2.5D Cf/SiC的磨削加工机理进行了考察分析,为2.5D Cf/SiC的磨削加工理论的研究提供了重要的技术支撑.