摘要：目的探讨肌萎缩侧索硬化(ALS)临床试验特点。方法全面检索美国临床试验数据库(***)和中国临床试验注册中心(ChiCTR)自建库至2023年12月10日期间注册的ALS临床试验相关信息,分析ALS国内外临床试验的研究设计、纳入人群、干预措施、结局评价等多方面的特点。结果***中ALS临床试验注册数量共765项,其中干预性研究540项;而ChiCTR中仅31项,差异较明显。美国是ALS临床试验(250项)主要开展地区,申办机构多为美国研究所或药企,北美、欧洲等地合作广泛。临床试验注册阶段多为Ⅱ期,暂停和终止的试验数量相对较少;纳入诊断标准多采用修订版EI Escorial标准;干预措施以药物治疗为主,近年研究主要围绕清除异常蛋白质、减轻神经炎症等方向展开;临床疗效评价指标以改良的肌萎缩侧索硬化功能评分量表(ALSFRS-R)运用最广泛。结论目前ALS临床试验整体数量较少,但研究数量呈上升趋势,新的干预措施不断涌现。在研究数量及创新性上国内外差异较明显,国际和区域间的合作亟需加强。

摘要：目的筛选有效抑制小鼠小胶质细胞(BV-2细胞)上Toll样受体9(TLR9)表达的小干扰RNA(siRNA)序列,并检测转染复合物的细胞毒性。方法设计并合成针对TLR9的3对siRNA(siRNA-836、siRNA-1549和siRNA-2410)及一条带绿色荧光标记(FAM)的通用阴性对照FAM-siRNA。在X-treme GENE siRNA转染试剂介导下转染BV-2细胞。倒置荧光显微镜下观察转染后BV-2细胞FAM-siRNA的分布,流式细胞仪检测转染效率,q-PCR检测TLR9的mRNA表达,Western blot检测TLR9蛋白的表达,并比较其抑制率,筛选出有效抑制靶基因表达的siRNA。CCK-8检测细胞存活率的变化。结果 BV-2细胞转染FAM-siRNA后6 h,胞质内可见绿色荧光分布。FAM-siRNA表达阳性率为(91.87±4.77)%。转染TLR9 siRNA后,BV-2细胞中TLR9 mRNA表达明显下降。与阴性对照组及序列siRNA-836、siRNA-2410相比,序列siRNA-1549的TLR9沉默效能最高,使BV-2细胞上TLR9 mRNA表达于24 h和48 h分别降低(77.89±4.23)%和(65.36±11.07)%,TLR9蛋白表达分别下降(48.37±20.56)%和(44.30±14.31)%。CCK-8检测TLR9 siRNA转染组与对照组相应时间点比较,BV-2细胞存活率无明显变化(P>0.05)。结论序列siRNA-1549对BV-2细胞上TLR9表达的抑制效果最大,利用RNA干扰处理BV-2细胞,对细胞基本无毒性作用。