摘要：目的构建肠道病毒71(enterovrius 71,EV71)的感染性克隆,为研究EV71毒力基因及新型疫苗设计等建立一个技术平台。方法用RT-PCR方法扩增出EV71FJ08149株全基因组,通过TA克隆组装进TOPO-XL-PCR载体中,获得全长cDNA克隆pFJ08149T5和pFJ08149T25。应用T7聚合酶系统在体外将线性化后全长cDNA克隆转录出RNA并转染RD细胞。通过间接免疫荧光试验、RT-PCR、序列测定及免疫电镜等对拯救病毒进行鉴定。结果 RNA转染后72h观察到典型的肠道病毒致细胞病变,拯救病毒经RT-PCR、间接免疫荧光和免疫电镜检测鉴定为EV71型,表明已成功构建了EV71感染性克隆。结论本研究成功构建出具有感染性的EV71全长cDNA克隆,为深入研究EV71的致病机制等提供了有利的工具。

摘要：随着信息技术的飞速发展,教育方式也在不断的革新。微课作为一种全新的教育方式,打破了传统的填鸭式教学模式,满足了学生个性化学习的需求。本文以高中化学为例,介绍了传统高中化学教学中的不足,结合高中化学教学的特点,从微课的设计制作、应用及其在翻转课堂应用中的方式进行论述,以期提高教学质量和学生的自学能力。