摘要：目的:观察Grp78靶向RNA干扰质粒载体对人类胃癌细胞株7901 Grp78基因表达的抑制作用.方法:设计1对Grp78基因发卡寡核苷酸,并与psiSTRIKETM质粒载体连接,构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子U6的真核表达载体,将重组质粒导入人类胃癌细胞株7901内,分别在转染前、转染后24,48和72h通过RT-PCR、免疫荧光技术检测Grp78mRNA及蛋白水平的表达情况.结果:成功构建RNA干扰质粒载体,靶向Grp78干扰质粒载体命名为psiSTRIKETM/Grp78.将上述质粒转染到人类胃癌细胞株后,观察到Grp78mRNA及蛋白水平的表达明显下调,随着时间的延长Grp78在实验组中的表达逐渐降低,并随着时间推移稳定存在.阴性对照组,转染前组,转染12,48,72h组Grp78的mRNA相对表达量分别为1.069,0.972,0.662,0.408,0.420.转染后组较转染前组及阴性对照组分别具有显著性差异(P0.05).转染前后组免疫荧光表达结果统计学差异明显(P<0.001),其中转染后48h同转染后24h相比较Grp78蛋白表达明显减少(P<0.00714).结论:构建的RNA干扰真核表达载体psiSTRIKETM/Grp78能明显抑制Grp78mRNA及蛋白的表达.

摘要：目的构建Grp94靶向RNA干扰质粒载体,观察其对人类胃癌细胞株SGC-7901 Grp94基因表达的抑制作用。方法从GenBank中选取人类Grp94基因序列,采用siRNA Target Designer-Version 1.51设计软件设计1对Grp94基因发卡寡核苷酸,序列符合siRNA表达载体siS- TRIKE^(TM)U6的要求并与psiSTRIKE^(TM)质粒载体连接,构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子U6的真核表达载体。采用Lipofectamne^(TM)2000转染试剂进行转染,将重组质粒导入人类胃癌细胞株SGC- 7901内,分别在转染前、转染后24、48和72h通过逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot及免疫荧光技术检测Grp94 mRNA及蛋白水平的表达情况。结果成功构建RNA干扰质粒载体,靶向Grp94干扰质粒载体命名为psiSTRIKE^(TM)/Grp94,将上述质粒转染到人类胃癌细胞株后,观察到psiSTRIKE^(TM)/Grp94能够明显下调Grp94 mRNA及蛋白水平的表达,并随着时间推移稳定存在。结论构建的RNA干扰真核表达载体psiSTRIKE^(TM)/Grp94能明显抑制Grp94 mRNA及蛋白的表达,提示通过降低胃癌细胞中Grp94的表达,可能抑制或辅助抑制胃癌细胞的生长的作用。

摘要：目的 观察Twist特异性小分子干扰RNA（siRNA）对乳腺癌细胞生长作用的影响.方法 设计、合成Twist特异性siRNA,转染至乳腺癌MDA-MB-231细胞.逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blot法检测细胞中Twist基因的mRNA和蛋白表达；Western blot法检测细胞浸润、凋亡相关蛋白表达；噻唑蓝（MTT）法及流式细胞术检测细胞生长及凋亡.结果 Twist-siRNA转染组与阴性对照组比较,mRNA和蛋白表达量明显降低（0.873±0.071比0.323±0.035、0.964±0.021比0.419±0.010,P＜0.05）；细胞浸润相关蛋白E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达增加（1.102±0.051比1.583±0.031,P＜0.05）；凋亡相关蛋白半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3表达增加（1.059±0.070比1.502±0.029,P＜0.05）；细胞生长速度明显降低；空白对照组、阴性对照组和转染组的细胞凋亡率分别为15.3％、16.1％和47.2％（P＜0.05）.结论 构建的Twist特异性siRNA能够显著下调人乳腺癌MDA-MB-231细胞株Twist基因表达,降低细胞体外增殖能力及肿瘤细胞浸润能力,提高细胞凋亡率.