摘要：目的:构建膜型基质金属蛋白酶-1(membrane-type matrix metalloproteinase-1,MT1-MMP)基因miRNA干扰载体,检测其对靶基因的沉默效率。方法:设计4种MT1-MMP基因特异性miRNA寡聚单链DNA,利用载体构建试剂盒构建MT1-MMP基因特异性干扰质粒,挑选阳性克隆,测序无误后扩增,表明载体构建成功。抽提干扰质粒,用脂质体2000转染HEK293细胞,通过实时荧光定量PCR法检测干扰载体对靶基因的干扰效果。结果:本实验成功构建了MT1-MMPmiRNA干扰载体,筛选出最有效的干扰载体X173-4,并检测出其对靶基因的沉默效率可达到75%。结论:本实验结果为进一步研究MT1-MMP在口腔癌侵袭转移机制中的作用提供实验基础。

摘要：目的构建一种自组装类釉原蛋白两亲性寡肽,作为釉质仿生矿化的有机模板。方法依据釉原蛋白分子在釉质形成中自组装成"纳米球"超分子结构的机制,参照目前"自组装多肽类生物材料"的设计特点,通过对釉原蛋白分子功能性残基进行改性,构建"类釉原蛋白两亲性寡肽"生物矿化模板,采用固相合成法合成并纯化,经质谱仪、高效液相色谱仪等鉴定。在寡肽溶液中加入1 mol/L的CaCl2溶液观察其能否自组装;将组装后的寡肽涂于透射电镜的铜网上,用2.5%的戊二醛固定1 h后先置于常温或40℃下10 mmol/L的CaCl2溶液中1 h,去离子水漂洗后再置于5 mmol/L的Na2HPO4溶液中1 h,5个循环后取出自然干燥,通过扫描电镜(SEM),透射电镜(TEM)及选区电子衍射(SAEDS)观察表征。结果类釉原蛋白两亲性寡肽序列为C18H35O-Thr-Lys-Arg-Glu-Glu-Val-Asp,高效液相色谱仪(HPLC)示多肽纯度为98.29%,质谱仪(MS)示肽的分子质量为1 142.41 u。通过Ca2+可使其自组装为纳米纤维超微结构的凝胶态。通过交替矿化发现组装后的类釉原蛋白两亲性寡肽能摄取溶液中的钙磷离子,在寡肽纳米纤维表面成核矿化,形成磷灰石晶体。结论成功构建了一种类釉原蛋白两亲性寡肽,可以作为釉质仿生的特异性生物矿化模板,用于诱导釉质再矿化研究。