摘要：目的总结针灸治疗近视临床对照试验中的十四经腧穴取穴规律。方法检索1980年1月至2010年4月中国期刊全文数据库、中国生物医学文献光盘数据库、中文科技期刊全文数据库、万方数据资源系统中针灸治疗近视的随机临床对照/临床对照研究。将纳入文献中腧穴按其筛选方法分类整理,设计资料提取表,统计各穴位出现的频数,对最后纳入腧穴按照其所在十四经分布、所属部位、所属特性等加以分类,进行相关数据处理。结果共纳入文献82篇,使用腧穴几乎涉及所有经脉,其中足太阳膀胱经的使用频率最大,其所属腧穴睛明、攒竹等作为主穴使用191次,占所有主要穴位的31.01%;所属腧穴胆俞等作为配穴共使用21次,占所有配穴的19.44%。其次为足少阳胆经,其所属腧穴风池作为主穴使用52次,占主要穴位的7.18%。82篇文献中十四经腧穴使用频数前12腧穴依次为:睛明(65)、攒竹(62)、风池(52)、太阳(47)、承泣(45)、四白(40)、合谷(33)、鱼腰(32)、丝竹空(30)、肝俞(24)、瞳子髎(22)、肾俞(21)。结论针灸治疗近视经脉主要以足太阳膀胱经为主,多以眼周腧穴作为治疗主穴。

摘要：目的 研究细粒棘球绦虫95抗原(Eg95)基因在新疆株细粒棘球绦虫不同发育阶段的表达及其基因序列差异。方法 根据Eg95基因序列设计引物,用PCR方法分别从新疆株细粒棘球绦虫3个不同发育阶段(原头蚴、六钩蚴和成虫)所构建的cDNA文库中克隆获得Eg95目的基因,将其克隆至pUCm-T载体、测序并进行序列分析。结果从3个不同发育阶段的新疆株细粒棘球绦虫cDNA文库中均克隆出Eg95基因,其基因片段长度为402bp,同源性比对分析(BLAST)结果表明,所克隆的新疆株Eg95基因与GenBank中的Eg95基因序列一致。结论 Eg95基因在新疆株细粒棘球绦虫不同发育阶段均有表达,其基因序列无差异。

摘要：目的建立多房棘球蚴（泡球蚴）感染小鼠肝脏丝氨酸蛋白酶抑制基因（Serpina3g）实时荧光定量PCR（RT—qPCR）的检测方法及与常规RT—PCR检测方法的比较。方法肉眼直视下肝脏穿刺注射100μl泡球蚴组织匀浆液建立泡球蚴感染小鼠模型，3个月后将小鼠处死，Trizol法提取肝脏总RNA，反转录获得cDNA。依据Serpina3g的编码基因（NM_009251）保守序列，通过Primer5软件设计定量引物，以β—actin作为内参。以健康小鼠肝脏获得的cDNA依次10倍梯度稀释制备标准品（1×10^2～1×10^6pg），利用SYBR Green RT-qPCR方法检测Serpina3g基因，然后根据cDNA浓度与循环值（Ct）的线性关系，绘制标准曲线，确定RT—qPCR检测的最佳条件和重复性；并将RT—qPCR结果与常规RT—PCR琼脂糖凝胶电泳结果进行特异性、灵敏度和定量等方面的比较。结果筛选出Serpina3g基因定量引物，最佳退火温度为56．g℃；RT—qPCR无非特异性扩增，标准品及样品熔解温度均在80．5℃，熔解峰单一；标准曲线斜率为-2．833（效率），相关系数r=0．996：5个不同梯度的样本（1×10^2～1×10^6pg）重复检测5次均为阳性，变异〈5％；mRNA检出限为1×10^2pg，总RNA在1×10^2-1×10^6pg内均可以进行扩增；常规RT-PCR方法mRNA检出限仅为1×10^6pg。结论成功建立了小鼠源Serpina3g的RT—qPCR检测方法，在特异性、灵敏度、重复性和定量方面优于常规RT—PCR。

摘要：卵透明带 3 (ZP3 )蛋白是透明带中的一种主要蛋白 ,在精卵结合过程中作为精子的初级受体起重要的作用 ,抗 ZP3抗体可以阻断精卵的相互作用 ,ZP3被认为是一种潜在的避孕疫苗的靶抗原。本文根据小鼠卵透明带(m ZP3 ) c DNA序列 (1 3 1 7bp)设计了上游和下游引物 ,从小鼠卵巢中提取总 RNA,经 RT-PCR克隆了鼠卵透明带 3基因的 c DNA,将其亚克隆至 p UCm-T载体后利用蓝白斑特性筛选出阳性克隆 ,酶切鉴定后测序比较 ,与Gene Bank小鼠 ZP3 c DNA序列完全相同 ,证明克隆出正确的小鼠 ZP3 c DNA.将 m ZP3克隆至真核表达质粒p CMV4上 ,构建完成了 DNA避孕疫苗的载体 p CMV4-m ZP3 ,为应用

摘要：目的探讨肝囊型包虫病患者外周血单个核细胞（PBMC）表面程序性死亡受体配体1（PD—L1）的表达及其与血清IFN-γ水平之间的关系。方法回顾性分析2010年6月至2011年2月新疆医科大学第一附属医院收治的63例肝囊型包虫病患者的临床资料。根据世界卫生组织包虫病专家组包虫病标准化分型原则将患者分为肝包虫活性组（38例）和肝包虫无活性组（25例），20例肝血管瘤患者及健康志愿者作为正常对照组。采用流式细胞仪及免疫组织化学法检测PD—L1阳性表达率，ELISA法检测血清IFN-γ的表达水平。组间比较采用成组设计资料t检验和单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD检验，总体分布采用X2检验，PD—L1阳性表达率和IFN-γ的表达水平的相关性分析采用Pearson检验。结果流式细胞仪检测肝包虫活性组、肝包虫无活性组和正常对照组PBMC表面PD—L1的阳性表达率分别为12．1％±3．8％、10．9％±2．5％和9．1％±2．5％，肝包虫活性组与正常对照组PD—L1的阳性表达率比较，差异有统计学意义（t=3．327，P〈0．05）。免疫组织化学检测肝包虫活性组、肝包虫无活性组和正常对照组PBMC涂片中PD—L1的阳性表达率分别为11．9％±3．4％、10．6％±2．9％和9．5％±3．6％，肝包虫活性组与正常对照组PD—L1的阳性表达率比较，差异有统计学意义（t=2．470，P〈0．05）。肝包虫活性组、肝包虫无活性组和正常对照组血清IFN—γ表达分别为（141±38）μg/L、（124±32）μg/L和（105±42）μg/L，肝包虫活性组与正常对照组IFN-γ表达水平比较，差异有统计学意义（t=3．280，P〈0．05）。流式细胞仪和免疫组织化学检测PBMC的PD-L1阳性表达率与血清IFN-γ表达水平均呈明显正相关（r=0．59，0．61，P〈0．05）。结论PD—L1可能在IFN-γ的作用下发挥着促进肝包虫免疫逃避的重要作用。

摘要：目的从新疆株细粒棘球绦虫原头蚴中克隆DNA聚合酶δ小亚基EgPolD2,进行序列测定和生物信息学分析。方法设计EgPolD2特异性引物,用RT-PCR方法从细粒棘球绦虫原头蚴cDNA中克隆EgPolD2基因,然后将其克隆至pMD18-T载体,测序并进行生物信息学分析,半定量反转录PCR分析其在细粒棘球绦虫原头蚴和囊泡中的表达情况。结果 EgPolD2基因开放阅读框为1 218bp,编码405个氨基酸,等电点为4.74。NCBI保守功能区分析软件预测EgPolD2蛋白第113～378个氨基酸为MPP_PolD2_C结构域。登陆GenBank进行Blast比对,EgPolD2与曼氏血吸虫SmPolD2基因同源性为32.1%,与线虫和人等其他物种PolD2基因同源性在18.3%～22.8%之间。进化树分析表明EgPolD2与SmPolD2相聚集,与其他物种同源性较低。半定量RT-PCR显示,EgPolD2在细粒棘球绦虫原头蚴和囊泡中均有表达,且表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论本实验成功克隆出细粒棘球绦虫EgPolD2新基因,为进一步研究抗细粒棘球绦虫药物靶标奠定了基础。

摘要：目的从新疆株细粒棘球蚴中克隆细胞外信号调节激酶（EgERK1）基因，进行序列测定、生物信息学分析，蛋白表达及功能初步鉴定。方法设计特异性引物，从新疆株细粒棘球蚴中提取总RNA，RT—PCR法扩增EgERKl基因，构建pET28a—EgERK1原核表达质粒，测序确定序列并进行生物信息学分析。构建正确的pET28a-EgERK1原核表达质粒，经诱导、表达EgERK1重组蛋白，聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western印迹检测其生物学功能。结果RT-PCR扩增出的条带经测序，结果显示其长度为1125bp，编码374个氨基酸，等电点为6．34，BLAST比对结果提示为一新基因，命名为EgERKl（EU701008）。同源性比较表明，EgERK1与多房棘球绦虫ERK基因（EmMPK1）同源性为95．45％，与线虫、酵母、果蝇和人类等ERK基因的同源性为43．04％～61．88％。进化树分析发现EgERKl和EmMPKl相聚集。功能分析预测EgERKl具有ERK类激酶T—X—Y结构保守区和酶激活功能域。Western印迹显示，原核诱导表达的EgERKl重组蛋白能与抗人ERK1／2抗体发生特异性免疫反应。结论成功克隆细粒棘球蚴EgERKl新基因，发现EgERK1重组蛋白具有与ERK1／2抗体结合的功能，为进一步研究该基因在寄生虫与宿主相互作用中的功能奠定基础。

摘要：目的构建人类8型疱疹病毒(HHV-8)基因开放读码框(ORF)_(73C)重组原核表达质粒并诱导表达,获得HHV-8潜伏态相关核抗原重组蛋白,并对其免疫活性进行初步鉴定。方法软件设计引物,分别在引物两端添加特异的酶切位点,以pGEM-Teasy/ORF_(73)质粒为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增ORF_(73C)基因序列,克隆入原核表达载体pET-28a(+),构建原核表达质粒pET28a- ORF_(73C)；转化*** DH_(5α),经酶切、测序鉴定其插入序列的正确性,转入*** BL21(DE3),并诱导表达,以多聚组氨酸亲合层析柱纯化,凝胶蛋白电泳、Western印迹方法行表达蛋白的分析和抗原特异性免疫鉴定。结果测序结果表明构建的pET28a-ORF_(73C)原核表达质粒连接正确,插入的ORF_(73C)基因片段为453 bp。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)表明ORF_(73C)基因成功表达,在相对分子质量20000处有表达条带；Western印迹分析显示重组蛋白能被卡波济肉瘤患者阳性血清识别,具有良好的抗原性。结论成功构建了pET28a-ORF_(73C)原核表达质粒,获得的纯化HHV-8潜伏态相关核抗原蛋白与卡波济肉瘤患者血清具有特异性识别,显示其作为检测抗原的可能,但其敏感性和特异性则有待进一步的验证。

摘要：为了研究白血病患者体内是否有NUP98 HOXA、NUP98 HOXB、NUP98 HOXC、NUP98 HOXD融合基因 ,提取了骨髓中单个核细胞总RNA ,用甲醛变性电泳检测其完整性 ;反转录合成cDNA第一链并设计了 17对引物 ,以巢式PCR法 (nested PCR )扩增NUP98 HOXA融合基因 ;一步法扩增NUP98 HOXB、NUP98 HOXC和NUP98 HOXD融合基因 ,4 12bpGAPDH作为内参照引物 ,2 %琼脂糖凝胶电泳判断PCR结果。结果表明 :所提RNA完整 ,反转录后PCR扩增每个样本中均有内参照GAPDH的表达 ,但是未发现有NUP98 HOXA、NUP98 HOXB、NUP98 HOXC、NUP98 HOXD融合基因。结论 :在本研究所取新疆白血病人群中没有检测到NUP98 HOXA、NUP98 HOXB、NUP98 HOXC和NUP98 HOXD融合基因。

摘要：目的:建立SYBR green实时荧光定量PCR检测微小RNA miR-21的技术平台及应用。方法:设计微小RNA21和U6的的颈环结构反转录引物和PCR扩增引物,以U6为内参利用SYBR green实时荧光定量PCR法检测小鼠各器官中的微小RNA21的含量。提取16例食管鳞癌患者的肿瘤组织及其近旁组织中的总RNA,检测其微小RNA21表达水平。结果:SYBR green实时荧光定量PCR检测U6和微小RNA21含量的熔解曲线单一,PCR产物特异。在Balb/c小鼠的4种器官中,肝脏、脾脏、肾脏分别为脑组织的8.71、5.38、3.47倍。16对食管鳞癌患者的样本中,14例微小RNA21的拷贝数高于其近旁组织约10.58倍(p<0.01)。结论:此研究成功建立了SYBR green荧光定量PCR法检测小鼠和人微小RNA-21含量的技术平台,为进一步阐述miR-21在食管鳞癌的发生中的作用提供了新方向。