摘要：目的 探讨RNA靶向沉默Notch1基因对肾透明细胞癌的增殖、凋亡及蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（protein kinase B/mammalian target of rapamycin,Akt/mTOR）信号通路的影响.方法 设计针对Notch1基因小干扰RNA（siRNA）片段,经脂质体转染入786-0细胞,RT-PCR及蛋白印迹法检测其干扰效果;MTT法绘制细胞生长曲线,TUNEL法分析细胞凋亡,蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、procaspase-3及Akt/mTOR信号途径相关蛋白Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、磷酸化mTOR（p-mTOR）、磷酸化P70核糖体蛋白S6激酶（Phosphorylation P70 ribosomal protein S6 kinase,p-P70S6K）的表达.结果 Notch1 siRNA转染786-O细胞后,Notch1基因的mRNA、蛋白表达均明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）.经Notch1 siRNA 0、40、60、80、100、120 nmol/L作用24 h后,786-0细胞的增殖率分别为（98.51±1.33）％、（87.34±2.26）％、（64.72±3.24％）％、（57.68±3.32％）％、（31.91±1.85）％、（19.27 ±2.73）％,随Notch1 siRNA浓度的增加细胞增殖率下降,差异有统计学意义（F=47.65,P＜0.01）.0、40、80、120 nmol/L Notch1 siRNA处理786-O细胞24 h后,凋亡率分别为（7.6±3.8）％、（21.5±4.8）％、（32.3±3.5）％、（46.3±4.7％）％,随着Notch1 siRNA浓度的增加细胞凋亡率增加,差异有统计学意义（P＜0.05）;凋亡相关蛋白Bcl-2、pro-caspase 3的表达下降;干扰Notch1基因后Akt总蛋白未见明显变化,而p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K的表达下降.结论 靶向沉默Notch1基因后,可抑制786-O细胞增殖,诱导细胞凋亡;沉默Notch1基因可通过去磷酸化抑制该Akt/mTOR信号通路.

摘要：目的探讨干扰沉默EZH2基因对肾癌ACHN细胞细胞株的增殖、凋亡及mTOR信号通路的影响。方法设计针对EZH2基因干扰RNA(shRNA),经脂质体将转染EZH2 shRNA入肾癌ACHN细胞,应用RQ-PCR及Western blot鉴定其干扰效果,MTT法绘制细胞生长曲线,TUNEL检测细胞凋亡的变化,Western blot检测组蛋白H3K27三甲基化水平(H3K27me3),凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Procaspase-3及mTOR信号通路蛋白mTOR、磷酸化mTOR蛋白(pmTOR)、磷酸化P70核糖体蛋白S6激酶(phosphorylation P70 ribosomal protein S6 kinase,p-P70S6K)的变化。结果EZH2 shRNA转染ACHN细胞48 h后,EZH2的m RNA和蛋白表达均明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),EZH2 shRNA组细胞增殖率明显低于Neg shRNA组和Control组(P<0.05),EZH2 shRNA组细胞的凋亡率为(45.57±5.26)%,而Neg shRNA组和Control组分别为(3.24±1.37)%、(1.65±0.94)%,差异有统计学意义(F=48.62,P<0.05)。促进凋亡蛋白Bax表达增强,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达减弱,凋亡执行蛋白前体Procaspase3减少。H3K27me3水平较Control组明显下降,而检测mTOR通路蛋白发现mTOR总蛋白未见明显下降,但是活性形式的磷酸化p-mTOR、p-P70S6K表达下降。结论干扰沉默EZH2基因可抑制肾癌ACHN细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是调节组蛋白H3K27me3水平变化,特异性抑制mTOR信号通路的活性。