摘要：放射治疗在肺癌的治疗中起着重要的作用。然而,提高肺癌的治愈率是一个重要的课题。MDM2基因在肿瘤的形成和增殖过程中起着重要的作用,可能是一个重要的靶基因。本研究自行设计了针对MDM2的反义核酸药物,通过RT-PCR和Westernblotting检测其抑制效率,然后通过流式细胞仪观察转染细胞受5Gy照射后的细胞死亡情况,MTT观察细胞照射后的增殖能力。结果发现通过反义治疗的策略成功降低了MDM2在肺癌细胞中A549中的表达,这导致了A549细胞辐射敏感性的增加。表明MDM2参与了A549的辐射抗性的形成,靶向MDM2的反义寡核苷酸可以增强肺癌细胞A549的辐射敏感性。

摘要：理想的抗肿瘤药靶的发现是设计高效低毒抗肿瘤药物的关键,抑制肿瘤血管生成仍是抗肿瘤药物研究的主流,生长因子及其相应的受体激酶已成为重要的抗肿瘤靶,细胞周期和凋亡调节基因作为潜在的抗肿瘤药靶也引起了人们广泛的兴趣, 另外, 蛋白法尼基转移酶、组蛋白去乙酰化酶和端粒酶也是很有前景的抗肿瘤药物靶标。现综述目前所发现的抗肿瘤药物靶分子的生物学特性, 它们作为抗肿瘤药物设计靶标的潜力以及目前针对这些靶分子进行药物发现的研究进展。

摘要：目的筛选出可与血管内皮生长因子受体2(KDR)mRNA高效、特异结合的反义寡核苷酸,探讨其体外抗肿瘤作用。方法先用寡核苷酸库杂交和计算机预测初筛反义寡核苷酸;经寡核苷酸芯片杂交验证,挑选与KDR mRNA有强杂交信号的反义寡核苷酸,用MTT法、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western blotting)探讨反义寡核苷酸对乳腺癌细胞系MCF-7细胞增殖和KDR表达的抑制作用。结果在寡核苷酸库杂交筛选出的13条反义寡核苷酸中,有8条(8/13,61.5%)在芯片杂交中显示较强杂交信号;而在计算机预测设计的17条探针中,只有1条显示较强信号。合成杂交信号较强的9条硫代反义寡核苷酸,均能有效抑制MCF-7细胞增殖,并呈剂量依赖性。其中抑制率最高的2条反义寡核苷酸为asON4和asON7,由寡核苷酸库杂交联合芯片杂交筛出,在0.8μmol/L时抑制率分别为51.6%和62.2%;同时,这2条反义寡核苷酸在mRNA水平和蛋白质水平抑制了KDR基因表达,并呈剂量相关性。结论寡核苷酸库杂交筛选和寡核苷酸芯片杂交筛选的结果有较好一致性,将寡核苷酸库和寡核苷酸芯片联用是一种较好筛选反义寡核苷酸方法。KDR反义寡核苷酸有明显的抗肿瘤作用。

摘要：根据端粒酶在肿瘤细胞中活性较高而在正常细胞中不表达的特性,针对端粒酶催化亚基hEST2mRNA的二级结构设计了12条反义寡核苷酸,以脂质体介导进行转染,MTT染色计算细胞生长抑制率,筛选出具有较强抗肿瘤活性的反义寡核苷酸hEST212,进一步对反义寡核苷酸进行了抗肿瘤特异性、抗瘤谱和抗肿瘤作用持续性分析.结果表明,反义寡核苷酸hEST212在体外细胞水平具有良好抗肿瘤活性,有望成为一种新型抗肿瘤候选药物;同时提示端粒酶催化亚基hEST2是研究肿瘤药物的潜在靶点.

摘要：目的:观察反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotides,asONs),细胞内源性表达的短发卡状小干扰RNA(shorthairpinsmallinterferingRNA,siRNA)对血管内皮生长因子受体2(VEGFR2/KDR:Vascularendothelialgrowthfactorreceptor2/kinaseinsertdomain-containingreceptor)表达的抑制作用,探讨阻断DKR蛋白表达对MCF-7细胞增殖、生长的影响,并对两者作了比较。方法:设计了3条反义寡核苷酸,并根据其相应靶KDRmRNA杂交位点,构建了3条以质粒pPUR/U6为载体的可内源性表达短发卡状siRNA的pPUR/U6/KDR-siRNA。分别用Western-blotting方法检测了MCF-7细胞经反义寡核苷酸处理,pPUR/U6/KDR-siRNA稳定转染后对KDR蛋白表达的抑制作用;用MTT法观察了反义寡核苷酸对MCF-7细胞增殖的影响,并观察了pPUR/U6/KDR-siRNA稳定转染细胞的生长曲线。结果:3条反义寡核苷酸于0.8μmol/L时,均有效抑制了细胞KDR蛋白表达,抑制率分别为66.16%,50.21%,58.35%;3条反义寡核苷酸对MCF-7细胞增殖也显示了剂量依赖性下调作用。相应靶位点3条pPUR/U6/KDR-siRNA中,有2条在细胞稳定转染时显著下调了KDR蛋白表达,15天抑制率分别为75.21%,80.08%;30天时为59.29%,60.15%;细胞稳定转染表达siRNA后生长变慢。结论:可根据有效反义寡核苷酸靶位点设计siRNA。