摘要：血吸虫病是世界上危害最严重的寄生虫病之一,其疫苗的研究是世界血吸虫病防治的一项工作重点也是一大难题。抗原表位是疫苗设计和免疫识别的基础,本文对抗原表位在疫苗设计中的分子理论基础做了阐述,介绍了其在血吸虫疫苗设计中的应用,并提出了一些问题与展望。

摘要：目的克隆日本血吸虫新基因TEGT(***)的全长序列。方法根据编码日本血吸虫大陆株的EST基因片段的序列,设计5’RACE的系列引物,扩增***的5’端,测序后预测该基因的全长ORF;再以此设计引物,以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板,用RT-PCR方法扩增得到***的全长cDNA。结果从日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA中克隆到1个TEGT相关基因,命名为***基因。其编码的蛋白的分子质量大约为30ku;对其编码的氨基酸序列的分析显示其编码蛋白有6个跨膜螺旋区。结论***是一个新基因,有必要对其功能进行深入研究。

摘要：近年发展起来的反向疫苗学,以“序列-结构-功能”思想为依据,以免疫信息学、计算机预测设计以及高通量的各种组学(包括基因组学、转录本组学、蛋白质组学等)综合集成技术为核心,可能为血吸虫疫苗候选分子的发现提供一条新途径。本文简要介绍了反向疫苗学常用的理论预测和实验方法;概述了应用反向疫苗学理论与技术筛选和鉴定血吸虫候选疫苗分子(保护性抗原或表位)的进展情况;最后,讨论了通过模拟辐照致弱血吸虫疫苗或人群获得性免疫的效应机制等来发展血吸虫反向疫苗学的可能的研究方向。

摘要：根据日本血吸虫菲律宾株编码 2 1 7kD蛋白的基因设计引物 ,以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板 ,用RT PCR法扩增出大小为 5 5 8bp的基因片段。经序列分析推断该基因片段为编码日本血吸虫中国大陆株2 1 7kD蛋白基因的完整阅读框 ,与菲律宾株该基因的碱基序列同源性为 98%。将其克隆到表达载体pET2 8a(+)中 ,在大肠杆菌BL2 1中获得表达 ,融合表达产物分子量约为 2 5 4kD。利用日本血吸虫成虫抗原免疫血清对该表达产物进行Western印迹检测 ,在预测位置出现了明显的识别条带 。

摘要：据日本血吸虫菲律宾株编码卵壳前体蛋白的一段230bp的序列设计PCR引物,以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板,用RT-PCR方法扩增出日本血吸虫中国大陆株相应的基因片段、然后根据测序结果设计一系列引物,用5’RACE和3’RACE法扩增出该基因cDNA的5’和3’端,再根据测序结果设计全长引物,用RT-PCR方法扩增出大小为423bp的片段。经序列分析推断该基因片段为编码日本血吸虫中国大陆株卵壳前体蛋白基因的完整阅读框,对相应基因组区段测序证实该基因没有内含子(GenBank登录号:AF519182)。将其克隆到表达载体pET28c(+)中,在大肠杆菌中获得表达,融合表达产物分子量约为20.9 kD。Real-ti me PCR结果显示该蛋白在尾蚴感染宿主后第23d即卵壳形成时高表达。利用日本血吸虫成虫抗原免疫血清对该表达产物进行Western印迹检测,在预测位置出现了明显的识别条带,说明该编码日本血吸虫中国大陆株抱雌沟蛋白基因的表达产物具有抗原性。

摘要：HaB1是亚洲璃眼蜱雌成蜱唾液腺差异表达基因文库中的一个片段,根据其序列设计引物HaB1-GSP1和HaB1-GSP2,以唾液腺总RNA为模板,RACE法扩增获得HaB1的未知3′-末端。测定该末端序列,进行序列拼接,设计全长引物5-′CCAGTCCGAAGGAAGGGCG-3′和5-′TCTC-CGGGCACGTGAAGTGTC-3′。以cDNA第一链为模板,扩增获得基因全长。经核查表明,该基因为一新基因(登录号AY803896)。

摘要：目的研制一种可用于疫区现场快速诊断家畜日本血吸虫感染的胶体金免疫层析试纸条。方法设计重组蛋白G并在大肠杆菌中表达,得到重组蛋白。对重组蛋白G进行胶体金标记并制备金标垫,分别用可溶性虫卵抗原(SEA)和重组蛋白G划线,作为检测线和质控线。采用组装的试纸条检测标准阴、阳性BALB/c鼠与新西兰大白兔血清,以及粪检阴、阳性的绵羊与水牛血清,评估其灵敏度和特异度;利用组装的试纸条检测前后盘吸虫病病牛血清,评价其交叉反应性。结果成功构建了重组蛋白G的原核表达质粒并在大肠杆菌中表达。以重组蛋白G制备的试纸条可用于检测日本血吸虫感染BALB/c鼠、新西兰大白兔、水牛、绵羊血清抗体。该试纸条检测日本血吸虫感染小鼠与兔血清的灵敏度、特异度均为100%;检测绵羊血清的灵敏度为100%,特异度为88.46%;检测水牛血清的灵敏度为94.44%,特异度为100%;其与前后盘吸虫交叉反应率为5.88%。结论成功研制能检测多种家畜血吸虫病的胶体金免疫层析试纸条,其检测家畜血吸虫感染的灵敏度和特异度均较高。

摘要：目的克隆表达日本血吸虫体表蛋白Sj29基因,分析其表达特性和免疫保护效果。方法根据日本血吸虫体表蛋白Sj29基因序列(GenBank登录号为AY814537)设计引物,PCR扩增目的基因,生物信息技术分析序列特性。将目的基因部分片段亚克隆到原核表达载体pET28c中,构建重组质粒pET28c-Sj29,将其转至大肠埃希菌后用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,组氨酸(His)柱亲和层析法纯化重组蛋白;蛋白质印迹(Western blotting)分析其免疫原性。30只雌性BALB/c小鼠均分3组,实验组每鼠皮下多点注射重组蛋白rSj29共100μl(0.1mg/ml,用206佐剂配制)、佐剂对照组和空白(PBS)对照组,分别免疫3次,每次间隔2周。末次免疫后2周用血吸虫尾蚴攻击感染小鼠,每鼠40±2条,感染后第53天剖杀,收集虫体计算减虫率;取肝脏和粪便计算减卵率。ELISA法检测实验鼠血清特异性IgG抗体水平,免疫组织化学法检测rSj29蛋白在各期虫体的定位,荧光定量PCR法分析各期虫体及攻击感染后42d虫体Sj29基因表达水平。结果获得576bp的Sj29基因。重组蛋白的相对分子质量(Mr)为22900,以包涵体形式存在。Western blotting表明,重组蛋白可被免疫小鼠血清和感染日本血吸虫的小鼠血清识别。攻击感染后42d,小鼠体内Sj29基因转录水平分别为佐剂对照组和空白对照组虫体的9.1倍和51.8倍。实验组小鼠成虫数(15.4±5.9)、肝组织虫卵数(40143.3±2995.9)和粪便虫卵数(3803.9±110.9)与空白对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。ELISA结果显示,免疫小鼠可产生高滴度(1∶32000)特异性IgG抗体。免疫组织化学结果表明,重组蛋白rSj29可在7、14d童虫,28、32d成虫和42d雄、雌虫的体表表达。荧光定量PCR结果表明,虫龄为32d的日本血吸虫成虫Sj29基因转录水平最高。结论重组蛋白rSj29有一定的免疫保护效果。

摘要：血吸虫卵壳蛋白基因是探讨血吸虫病免疫预防的重要靶标。本研究根据已发表的多个血吸虫卵壳蛋白基因的核苷酸序列,设计合成了特异引物,体外扩增和克隆了编码日本血吸虫中国大陆株卵壳蛋白基因SjESG的cDNA,测序结果表明与已发表的卵壳蛋白基因序列有较高同源性。为进一步研究该基因的功能,将其克隆入pcDNA3中,成功构建了真核表达载体,为SjESGDNA疫苗的研究打下了基础。

摘要：本研究根据曼氏血吸虫抱雌沟蛋白 (Gynecophoralcanalprotein)基因SmGCP保安区片段设计一对引物 ,以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板 ,用TR_PCR法扩增出一大小为 86 8bp的基因片段。测序后分析序列推断该片段与SmGCP相应片段碱基同源性 86 .6 % ,说明所克隆的基因为编码日本血吸虫中国大陆株抱雌沟蛋白基因 ,推断的氨基酸序列同源性为84.1%。将其克隆到表达载体pET2 8(a)中 ,在大肠杆菌BL2 1中获得了较高量的融合表达 ,表达产物分子量约 2 9kD。利用日本血吸虫成虫粗抗原免疫大白兔所得抗血清对该表达产物进行Westernblot检测 ,在预测位置出现了明显的识别条带 ,显示了该表达产物良好的抗原性。将该表达产物用佐剂处理免疫昆明系小鼠 ,攻击血吸虫尾蚴 ,7周后剖杀小鼠冲虫 ,进行成虫和虫卵计数 ,其减虫率为 35 .2 % ,减卵率为 37.8% ,与对照组比较差异显著 ,初步证明血吸虫抱雌沟蛋白具有一定的免疫保护功能。