摘要：为建立同时能鉴别甲型H1N1和猪流感病毒常见亚型的新型基因芯片检测方法,根据GenBank中已发表的甲型流感病毒MP的基因序列和甲型H1N1(2009)和猪流感病毒H1N1、H3N2亚型的基因序列,设计、筛选并合成7对特异性引物和1对通用引物;根据扩增的靶序列,设计并合成14条特异性探针和3条质控探针,制备了甲型H1N1(2009)流感病毒和猪流感病毒H1N1、H3N2亚型基因芯片;并进行了特异性试验、敏感性试验和田间样品的检测。结果显示,该芯片检测方法与猪细小病毒(PPV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等猪常见病毒无交叉反应;对猪H1N1、猪H3N2和甲型H1N1(2009)流感病毒而言,最低可检测到105、104和105稀释的病毒株。结果证实,该方法特异性强、敏感性高,是一种高通量的甲型H1N1和猪流感常见亚型筛查方法。

摘要：猪链球菌病是严重危害人兽健康的一种传染病。常规的猪链球菌血清学检测方法不但费时,而且只能鉴定到血清型。荧光PCR技术是一种新型扩增待检基因的方法,采用“闭管”操作,灵敏度比常规PCR高出100倍以上,而且整个过程只需要0.5－2h,还可避免常规PCR操作时EB染色的危害及PCR后处理可能带来的假阳性,是目前为广大科研工作者所青睐的一种病原的快速鉴定方法。本研究选择MRP设计引物进行PCR,反应结束即可根据扩增曲线判定有无目的基因,从而确定待检菌是否为猪链球菌2型致病株。本方法的建立,为疫情发生后,有针对性地采取紧急防控措施、严防疫情传入传出奠定了基础。[第一段]

摘要：非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)感染引起的一种高度接触性传染病。由于ASFV的感染机制极为复杂,基因型多,至今尚无有效疫苗用于防控,防止该病暴发主要依赖于早期快速诊断和控制。为建立一种高效快速、特异的ASFV检测方法,根据ASFV的E184L基因序列,设计了TaqMan荧光定量PCR引物及探针,建立了检测ASFV的TaqMan荧光定量PCR方法。结果表明,该方法设计的引物具有高度特异性,以构建的重组质粒为标准品建立的TaqMan荧光定量PCR方法的标准曲线具有良好的线性关系,线性相关系数为0.992,对ASFV核酸最低检测限为1.51拷贝,且与伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型等不存在交叉反应。建立的基于ASFV E184L基因实时荧光定量PCR检测方法能够快速、准确、特异地对ASFV核酸进行定量分析,丰富了ASFV的检测方法。

摘要：针对禽流感病毒M基因设计了特异性引物和探针,将不对称RT-PCR扩增产物和偶联到磁性微球上的探针进行杂交,通过检测荧光值,建立了检测禽流感病毒通用亚型的液相芯片方法,并对该方法进行了特异性、敏感性、稳定性试验以及田间样品检测试验。结果表明,该方法能特异地检出禽流感病毒,病毒核酸的最低检出量为10-4 ng,与新城疫病毒、禽传染性支气管炎病毒等常见病毒无交叉反应。该方法具有检测准确,特异性强、灵敏度高、简便快速的优点,为一种快速、准确、高通量检测动物疫病的新方法。

摘要：水稻种植的过程中,沟系的建立十分重要,良好的沟系不但便于水层的管理,还利于地块排水,为下茬作物种植时创造较好的墒情。基于以上理念,根据实际生产需求,自主设计研制了水田开沟送土一体机,解决了全程机械化开沟依靠人工的难题。

摘要：目的根据禽流感病毒H1、H3、H5亚型的HA基因和N2型NA基因的保守序列,设计出四对RT-PCR引物,建立一步法多重RT-PCR对禽流感H1、H3、H5、N2四亚型进行快速检测。方法利用所设计的四对引物,通过对该方法扩增条件的优化,成功建立快速检测禽流感病毒H1、H3、H5、N2四亚型的一步法多重RT-PCR。利用禽流感H1、H3、H5、N2四亚型毒株和其它相关标准毒株进行敏感性和特异性试验。结果与结论所建立的一步法多重RT-PCR具有较高的特异性和敏感性,与禽流感其它亚型和NDV、IBV、ARV?IBDV的核酸均无交叉反应。用该方法检测现场样品395份(4省20多个地区),结果与经典检测方法一致。

摘要：以小反刍兽疫病毒N基因序列为靶基因，通过设计引物及TaqMan探针建立快速检测小反刍兽疫的荧光PCR方法。在线BLAST分析结果表明：所设计的引物特异性强，可区分小反刍兽疫病毒及牛瘟病毒感染；所建立的方法检测线性范围为1—1×10^6拷贝质粒DNA，灵敏度可达10拷贝质粒DNA，是常规PCR法的100倍。应用所建立的方法对32份采自西藏疫区的组织样品进行检测，说明疫情在西藏没有扩散。

摘要：为建立一种准确、特异、高效、快速的非洲猪瘟病毒定量检测方法,本研究根据非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)早期表达基因K196R的基因序列,设计了TaqMan荧光定量PCR引物及探针,通过优化退火温度、引物及探针浓度,建立了快速检测ASFV的TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果表明,该方法选择的引物具有高度灵敏性和特异性,以构建的重组质粒为标准品建立的TaqMan荧光定量PCR方法的标准曲线具有良好的线性关系(R2=0.998),对ASFV核酸最低检测下限为1.3拷贝,且与猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型等多种病原不存在交叉反应。本研究建立的K196R基因实时荧光定量PCR检测方法为非洲猪瘟疫情提供了一种新型、灵敏和特异的早期检测方法。

摘要：为应用液相芯片技术建立同时检测H5、H7、H9亚型禽流感病毒(AIV)的方法,在GenBank中收集H5、H7、H9亚型AIV的HA基因序列,利用DNAMAN软件分析比较筛选出特异的保守片段,设计引物和探针。将多重不对称RT-PCR扩增产物与偶联荧光微球的探针进行杂交,建立多重液相芯片方法。结果显示,多重液相芯片技术对H5、H7、H9亚型AIV核酸的最低检出量分别为18.5、28.7、20.7pg/μL,检测的特异性和重复性都很好,应用该方法和禽流感检测试剂盒双盲试验同时对50份已知病毒的样品进行了检测,两者符合率为100%。该方法为禽流感病毒核酸液相芯片的进一步研究奠定了基础。

摘要：随着现代农业机械化的发展,农业机械数量、种类不断增多,技术水平不断提高。但在渔业养殖方面机械化程度较低,主要机械化运用在饲料的投放。在鱼塘喷药机方面,仍然依靠人工,作业效率低、效果差。针对此类情况,研发了一款移动式喷枪式鱼塘喷药机。