摘要：制药分离工程是一门实践性较强的课程,传统授课模式侧重于理论知识的讲解,缺乏对学生解决实际问题的能力和设计能力的培养。以“金雀花花蕾中异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖的提取”工程案例和实施过程为例,介绍如何通过案例教学和现代信息技术强化学生实践能力的培养,并对案例教学应用于制药分离工程教学进行了探讨。

摘要：昆明理工大学药学与制药工程专业2020年获批国家级一流本科专业建设点,为国内一流的地方高校制药工程本科专业。为了培养高素质的药学与制药工程专业人才,该专业在国内首开了“制药工程项目评估”课程。这门课的教学目标是使学生能够综合运用经济、法律、管理、土建、环保、制药工程等多个专业学科的知识,能独力撰写制药工程项目评估报告,并通过该课程的学习达到理论与实践相长的目的。介绍该课程的教学设计、考核方式、优势与质量提升方向,以期通过不断提升该课程的质量而为毕业生质量的提高做出贡献。

摘要：【目的】对泽泻、决明子、绞股蓝等3种中草药超微粉用量进行优化组合,探索降低鸡蛋胆固醇的中草药复方添加剂最佳配方。【方法】选取泽泻、决明子、绞股蓝超微粉用量3因素为自变量,以蛋黄胆固醇浓度为响应值,采用响应面法中Box-Behnken模型,共设计17种中草药复方添加剂配方,选取190日龄绿壳蛋鸡255羽,随机均分成17组,分别饲喂添加了17种中草药复方添加剂配方的基础日粮,测定饲喂第28天各组鸡蛋蛋黄胆固醇浓度,确定中草药复方添加剂最优配方。另取190日龄绿壳蛋蛋鸡30羽,平均分成2组,空白组饲喂基础日粮,试验组饲喂基础日粮+最优配方中草药添加剂,饲喂28d后测定蛋鸡生产性能、鸡蛋品质、蛋黄胆固醇和甘油三酯浓度、血清生化指标、免疫指数等,评估最优中草药复方添加剂配方的饲喂效果。【结果】响应面优化得到的降低鸡蛋胆固醇中草药复方添加剂的最佳配比为:泽泻超微粉用量695.49 mg/只,决明子超微粉用量893.14 mg/只,绞股蓝超微粉用量334.13mg/只,该条件下饲喂28d后测定的鸡蛋胆固醇浓度为2.48mmol/L。饲喂效果验证试验结果表明,与空白组相比,试验组的料蛋比降低了33.64%,产蛋率提高了11.73%,差异均达显著水平(P<0.05);蛋黄胆固醇和甘油三酯浓度分别降低了69.90%和41.78%(P<0.05),血清胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇浓度分别下降了52.90%,55.23%和51.85%,并显著提高了蛋鸡的免疫能力(P<0.05)。【结论】响应面法能够用于中草药复方添加剂配方优化;用得到的中草药复方添加剂最优配方饲喂蛋鸡,能显著降低鸡蛋胆固醇浓度,可在实际生产中推广应用。

摘要：对硫化叶菌病毒(Sulfolobus virus)STSV2脱氧尿苷焦磷酸酶(dUTPase)基因进行克隆表达,并分析其酶学特征.根据STSV2的dUTPase基因序列设计特异性引物,以病毒STSV2 DNA为模板进行PCR扩增,将产物克隆至原核表达载体pET32a(+)中,然后,将其转化至Escherichia coli BL21(DE3)进行dUTPase的IPTG诱导表达及纯化,通过SDS-PAGE检测其大小,并测定其酶学活性.结果表明,诱导表达的重组dUTPase蛋白分子量(Mr)约为38×103(含pET32a(+)自带的助溶标签),重组dUTPase在Mg2+存在的情况下能特异性催化dUTP生成dUMP和PPi,其反应最适温度为60℃,在pH值3-8之间有较高的活性,其在提高PCR扩增效率和特异性方面具有一定的作用.本研究通过克隆表达获得了硫化叶菌病毒(Sulfolobus virus)STSV2脱氧尿苷焦磷酸酶,其在基因扩增领域有一定的应用价值.

摘要：以屎肠球菌和枯草芽孢杆菌为研究对象,以MRS培养基为基础培养基,采用单因素试验、Box-Behnken实验设计对屎肠球菌和枯草芽孢杆菌的混合培养进行优化。结果表明:初始p H、装液量和氮源对活菌数影响显著。最优条件为:初始p H 6.5、装液量50/500 m L、氮源用量35 g/L、接种比1∶12、转速180 r/min,在此条件下活菌数达到6.99×1010 CFU/m L,比优化前提高了5倍,屎肠球菌菌株和枯草芽孢杆菌菌株的活菌数分别达到4.58×1010 CFU/m L和2.41×1010CFU/m L。

摘要：Δ12-脂肪酸脱氢酶一般特异性催化在油酸的Δ12位引入双键转变成亚油酸.为了从粘红酵母YM25079中克隆全长Δ12-脂肪酸脱氢酶基因序列,参考已知的Δ12-脂肪酸脱氢酶基因序列设计基因特异性引物,通过PCR扩增获得到全长为1 353 bp的cDNA序列,序列分析结果表明该序列具有一个编码450个氨基酸的完整开放阅读框,所编码蛋白质的大小为50.9×103.与报道的Δ12-脂肪酸脱氢酶一样,推测的氨基酸序列具有膜整合脂肪酸脱氢酶特异性的3个组氨酸保守区,表明该序列为一个新的编码Δ12-脂肪酸脱氢酶的基因.为了验证其功能,把开放阅读框序列亚克隆到表达载体pYES3/CT,构建重组表达载体pYRGD12,并转化到酿酒酵母的缺陷型菌株INVScl进行表达.脂肪酸气相色谱(GC)分析表明,该序列所编码的蛋白质具有Δ12-脂肪酸脱氢酶活性,能将油酸转化为亚油酸,亚油酸的含量占酵母总脂肪酸的4.31%.以上结果表明,PCR所获得序列是新的Δ12-脂肪酸脱氢酶基因.

摘要：《制药工艺学》是制药工程专业的重要课程,开展课程实验设计对于提升《制药工艺学》教学效果较为重要。基于云南丰富的灯盏花资源,昆明理工大学生命科学与技术学院开展了《制药工艺学》教学实验-灯盏花乙素的制备工艺。本实验教学通过热回流提取、萃取、聚酰胺酚柱层析和结晶几个步骤,即可从云南特色植物-灯盏花中获得纯度较高的灯盏花乙素。实验易于操作,实验内容涵盖了原材料预处理、提取、分离纯化及干燥等课程内容。通过以上实验教学,有效地提高《制药工艺学》的教学质量。

摘要：Δ^(12)-脂肪酸脱氢酶是多不饱和脂肪酸合成的关键酶.参考已知的Δ^(12)-脂肪酸脱氢酶基因序列设计特异性引物,通过PCR扩增从红冬孢酵母YM25235中获得了全长为1 341 bp的一个cDNA序列.序列分析表明,该序列具有一个编码446个氨基酸、相对分子质量为50.6 ku的完整开放阅读框,所编码的氨基酸序列与Δ^(12)-脂肪酸脱氢酶相似性最高但并不相同,而且也具有Δ^(12)-脂肪酸脱氢酶特异性的3个组氨酸保守区,表明该序列为一个新的编码Δ^(12)-脂肪酸脱氢酶的基因.为了验证功能,将该基因序列克隆到表达载体pYES3/CT中,构建重组质粒pY3RKD12,并转化到酿酒酵母的缺陷型菌株INVSCI中进行异源表达.通过脂肪酸气相色谱(GC)分析表明,在pY3RKD12转化的酵母细胞总脂肪酸中出现一个保留时间和亚油酸甲酯标准品相同的新峰,其含量占酵母总脂肪酸的3.76%,但在pYES3/CT转化的酵母细胞总脂肪酸中没有检测到.这些结果证明所克隆的序列是一个新的Δ^(12)-脂肪酸脱氢酶基因,其表达的蛋白质可催化油酸合成亚油酸.

摘要：《制药分离工程》是制药工程专业的主要专业课程,开展课程实验设计对于开展《制药分离工程》教学较为重要。《制药分离工程》教学实验开展了苦参碱的分离纯化,实验教学通过丙酮室温浸提、萃取、调p H值、硅胶柱层析和结晶几个步骤,即可从云南特色花卉-白刺花中获得纯度较高的苦参碱。实验简便、易于操作,实验内容涵盖了固液分离、液液萃取、色谱分离和结晶等课程内容,通过以上实验教学,有效的提高《制药分离工程》的教学质量。

摘要：根据转录组测序结果设计特异性引物,以深黄被孢霉(Mortierella isabellina)M6-22的c DNA为模板,PCR扩增苹果酸脱氢酶基因MIMDH2,测序结果显示该序列长1 017 bp,编码338个氨基酸。序列分析表明该序列与已报道的烟曲霉(Aspergillus fumigates)线粒体苹果酸脱氢酶的相似性最高,达71.26%,且含有苹果酸脱氢酶的保守辅酶结合位点、底物结合位点和催化活性位点。将MIMDH2片段连接到表达载体pET32a(+)中,构建重组表达质粒pET32a-MIMDH2,并转化至大肠杆菌BL21中进行诱导表达,SDS-PAGE电泳检测结果显示在50 k D左右处有一蛋白质条带,酶活分析结果显示经镍柱亲和层析纯化的重组蛋白酶活高达271.33 U/mg。以上结果说明所克隆的MIMDH2为一个新的潜在的苹果酸脱氢酶基因,所编码的蛋白质具有苹果酸脱氢酶的活性。