摘要：建立了一种常规PCR方法用于检测一系列原料和加工食品中小麦致敏成分的DNA。针对小麦的ω-醇溶谷蛋白设计了一对大小为185 bp的引物。检出限为10 ng。该法能检测热加工食品中的小麦DNA,并具有良好的特异性,可作为食品无谷蛋白标识的检测方法。同时它弥补了免疫化学方法的不足,并为乳糜泻患者的食品安全提供保障。

摘要：谷物致敏患者会对谷物致敏原产生不适当免疫反应而患乳糜泻,这是一种小肠慢性炎症性疾病。目前该病没有有效治疗方法,患者只能终身进行无谷蛋白食疗。燕麦是谷物致敏原(小麦、大麦、黑麦和燕麦)之一,因此建立了一种常规PCR方法来检测食品中的燕麦致敏原。针对燕麦的致敏蛋白—燕麦蛋白的编码基因设计了一对大小为171 bp的引物。通过琼脂糖凝胶电泳和凝胶成像系统对PCR的扩增结果进行分析,并经测序进一步确证。结果表明此方法具有良好的特异性,理论检出限和实际检出限分别可达10 ng/μL和10%,而且能检测热加工食品中的燕麦DNA,故可应用于食品中燕麦致敏原的日常检测。

摘要：目的建立一种常规PCR法同时检测食品中的小麦、大麦和黑麦致敏原(WBR155bp)。方法采用ClustalW软件分析小麦ω-醇溶谷蛋白、大麦醇溶谷蛋白和黑麦ω-黑麦碱的核苷酸编码序列的同源性,进而确定同源区域,用Primer Premier5.0基于同源区域设计引物。选取不同种属的植物考查所建立PCR方法的特异性。将小麦粉,大麦粉、黑麦粉与米粉混合制备谷物含量梯度为100%、10%、1.0%、0.1%、0.01%的样品,考查WBR155 bp的检出限。结果扩增产物片段<200 bp,可以检测到高度降解的DNA片段。引物WBR155bp对小麦、大麦和黑麦的检出限分别为1.0%, 0.01%和0.1%。结论该方法具有良好特异性,可用于食品中的小麦、大麦和黑麦致敏原的日常检测。

摘要：乳糜泻是患者对小麦、大麦、黑麦和燕麦中的谷蛋白产生的一种不适当免疫反应。患者只能通过终身无谷蛋白食疗来避免严重并发症。本文建立了一种常规PCR方法来同时检测食品中大麦和黑麦致敏原。引物BR108bp是针对大麦醇溶谷蛋白3编码序列设计的,在GenBank上经Blast,发现理论上特异性很好。然而通过试验发现,该引物除了在大麦处出现相应扩增外在黑麦处也扩增出大小约为108bp的条带。经测序和比对,发现以大麦和黑麦为模板的扩增产物测序结果一致,并且只与模板序列相差一个碱基,这说明黑麦也含有这段序列,只是在核酸数据库中没公布,因此可以说是发现了黑麦的部分基因序列。通过多次试验,结果表明:该引物只在大麦和黑麦处出现相应扩增,具有良好特异性,针对大麦和黑麦的理论检出限均为1.0ng/μL,实际检出限均为1.0%。而且能检测热加工食品中的大麦和黑麦DNA,故可用于日常检测。