摘要：某特种装置前支座为轴瓦式分体组合卡箍形式,受力情况复杂,静力试验加载设计成为技术难点。提出一种能够进行角度翻转的试验加载装置,包括角度翻转夹具、过渡平台和加载夹具。角度翻转夹具为矩形工字梁结构,可实现角度转换;过渡支撑平台为槽钢梁与钢板组合结构,负责载荷传递;加载夹具为杠杆式二力杆结构,实现拉压双向载荷施加。三部分以均匀挤压试验件中间圆孔壁的形式对支座进行加载,模拟特种装置的实际受载情况。对试验加载装置的三部分实施强度校核,各部件的强度均满足要求。试验验证表明,该加载设计方法合理可行,虽然试验数据与理论计算结果存在些许偏差,但各工况下支座各部位受力变化趋势一致,达到了设计需求。

摘要：根据GenBank已知的H6N1亚型流感病毒的NA基因序列,设计扩增NA基因的特异性引物,通过RT-PCR技术扩增5株H6N1亚型禽流感病毒NA基因序列,并将其克隆到pMD18-T载体后进行了测序分析。同时通过生物学软件对5株禽流感病毒NA基因进行了分析研究。结果表明:5株禽流感病毒NA基因全长1 410 bp,编码470个氨基酸,不存在氨基酸缺失现象;抗原位点和糖基化位点与参考序列野鸭源N1亚型禽流感病毒相比变化不大。5株禽流感病毒NA基因与参考序列的同源性为79.6%～97.6%,其中与参考序列野鸭源H1N1亚型的同源性最高。结合进化树分析结果推测,5株禽感病毒与野鸭源H1N1亚型禽流感病毒的亲缘关系密切。

摘要：根据Genbank上已发表的H4N6亚型的NS基因序列,设计一对特异性引物,成功扩增出一株野鸭源禽流感病毒扎龙分离株A/mallard/ZhaLong/88(H4N6)的NS基因,并将该片段连接到PMD18-T载体上,连接产物转化至DH5α感受态细胞,对目的片段进行测序,获得了NS基因全序列,大小为887bp。该片段的核酸序列与已知的几个毒株序列进行同源性比较,同源性为78.4%～97.6%,推导的氨基酸序列同源性为80.8%～98.6%。

摘要：根据已知禽流感病毒(AIV)的8个基因序列设计合成12对特异引物,通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,分别成功扩增出分离于东方白鹳(Ciconia boyciana)的1株H11N9亚型禽流感病毒的全基因序列,将其分别克隆到pMD18-T载体后进行序列测定。同时将8个基因片段与GenBank发表的相应序列进行比较,绘制各基因的进化树。结果表明:所克隆到的8个片段均包含相应病毒基因的完整开放阅读框架,长度分别为2280、2274、2151、1692、1497、1413、759、838bp核苷酸,分别编码759、757、716、563、498、470、252/97、230/121个氨基酸。该毒株HA有7个潜在糖基化位点;在HA裂解位点序列为PAIASR↓GLFG,无连续的多个碱性氨基酸插入,具有典型的低致病性禽流感病毒特征。根据该毒株与参考毒株的序列比较分析结果推测,该分离株可能是不同亚型禽流感病毒通过互相基因交换所形成的基因重组体。

摘要：根据GeneBank上已发表的H3N8亚型禽流感的非结构蛋白基因(NS)序列,设计了一对特异性引物,成功地从A/mallard/SanJiang/167/2006(H3N8)中克隆到NS基因序列,该克隆基因全长860bp,编码NS1和NS2两种非结构蛋白。与其他H3N8亚型的NS基因进行了同源性比较,核苷酸同源性为65.5%～98.3%,推导的氨基酸序列同源性为65.4%～97.8%。NS基因遗传进化树形成两个分支,该分离株处于等位基因B组。另外,此毒株NS基因在263～277位没有发生15个碱基的缺失。A/mallard/SanJiang/167/2006(H3N8)株149位为丙氨酸,其不能感染哺乳动物。

摘要：根据犬瘟热病毒(CDV)H蛋白基因的保守序列设计了1对引物,经过各反应体系和反应条件的摸索和优化,建立了CDV的SYBR GreenⅠRT-PCR荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,建立的方法特异性较好,几种非CDV病原体检测均为阴性;敏感性实验表明其敏感性可达1个TCID50,高于普通RT-PCR和胶体金检测试剂盒;重复性试验表明所建立的检测方法非常稳定;临床检测中,在39份样品中检测到28份阳性样品,高于普通RT-PCR方法的检出率。该方法检测成本低、特异性强、敏感性高、重复性好,可推广应用于毛皮动物CDV的大规模高通量的检测。

摘要：为建立检测多种猫科病毒的多重PCR方法,本研究参照GenBank中登录的猫细小病毒(FPV)的NS基因序列、猫杯状病毒(FCV)的ORF2基因序列以及猫疱疹病毒(FHV-I)的TK基因序列设计合成3对引物,通过对反应体系及条件的优化,建立了可以同时扩增FPV(392 bp)、FCV(922 bp)和FHV-I(290 bp)的多重PCR方法。该检测方法结果表明:在同一PCR反应体系中可以同时检测出以上3种病毒,FPV、FCV和FHV的最低检出限分别为101.5TCID50、101.9TCID50和101.2TCID50。以该方法对黑龙江省各地区收集的120份血清进行检测,其中FPV、FCV和FHV-I的阳性率分别为5%(6/120)、2.5%(3/120)和4.1%(5/120),证明该方法可以用于3种病毒的检测,具有良好的特异性和敏感性。

摘要：对东北虎粪便进行虫卵检查,分离获得了自然感染的球虫卵囊。对球虫卵囊的形态和经培养发育后的各阶段的卵囊形态进行了观察。东北虎源球虫卵囊符合等孢属球虫的形态学特征。根据Genbank上发表的猫等孢球虫18S rDNA序列(L74671)设计一对特异性引物,利用PCR技术对东北虎源球虫的18S rDNA进行了扩增。扩增得到一段360bp的DNA片段,并对该片段进行了序列测定。测序结果和其它17种原虫的相应序列进行序列同源性比较分析,分析显示东北虎源球虫和其它等孢属球虫单独聚为一类。结合对东北虎源球虫的卵囊形态、卵囊发育情况及序列分析结果,确定其为等孢属球虫。

摘要：根据哺乳动物铜蓝蛋白蛋白氨基酸的保守序列,参考犬的铜蓝蛋白基因序列,设计一对特异性引物,采用RT-PCR技术,从貉的肝脏中扩增出一段长223 bp的序列。对其序列分析表明该基因序列与GenBank中已发表的犬的铜蓝蛋白基因(GenBank序列号:XM-534301,XM-860792,XM-860808)同源性为100%,证实了貉亦存在铜蓝蛋白基因且高度保守。

摘要：扩增、克隆H6N1亚型禽流感病毒(AIV)A/mallard/Sanjiang/275/2007(M-275)的全基因序列,进行序列分析,并探讨该病毒的进化特点。设计特异性引物,扩增克隆2007年从三江自然保护区野鸭身上分离到的H6N1亚型AIV,测序后进行序列分析。同源性分析发现,M-275与H6亚型和N1亚型AIV同源性最高,说明M-275为H6N1亚型。其裂解位点为PQIETR↓G,无连续碱性氨基酸的插入,说明M-275属于典型的低致病性毒株。通过序列比对,M-275的HA基因与2000年以后北美以及中国地区分离到的H6亚型AIV同源性在97%以上,与HA基因同源性最高的毒株为A/northern pintail/Alaska/44202-143/2006(H6N1)和A/northern pintail/Alaska/44204-158/2006(H6N4),与NA基因的核苷酸同源性最高的毒株是A/mallard/ON/499/2005(H5N1),推测M-275的NA基因片段来自于该病毒谱系。进化分析结果显示,HA基因与美国、日本、中国等国家和地区流行的N1、H2、N4、N8和N9等亚型毒株处于同一分支;NA基因与美国、日本等国家和地区流行的H2、H5、H6、H11、H3等亚型毒株处于同一分支;PB1基因与美国、日本等国家和地区流行的毒株处于同一分支;而PB2、NP、M以及NS基因则与日本、韩国、香港和中国地区的病毒株处于同一分支;PA同中国地区和澳大利亚、马来西亚、瑞典等国家的毒株处于同一分支。M-275毒株基因组构成来源复杂,NA基因和NP基因分别与野鸭源的H5N1和H1N1等毒株同源性很高,表明H6亚型禽流感病毒也在不断的发生重排,值得深入研究。