摘要：目的利用CRISPR/Cas9系统敲除4T1细胞中的CXCR4基因,构建稳定敲除CXCR4基因的4T1细胞株。方法根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,在美国国立生物技术信息中心(NCBI)上找到CXCR4基因序列的外显子区域,设计两条sgRNA,用Lenti CRISPRv2作为载体构建Lenti CRISPRv2-sgRNA重组质粒并转化至感受态的Stbl3菌体中,挑取单克隆测序验证并扩大培养提质粒后转染至293T细胞中包装成慢病毒。收集病毒并感染4T1细胞,通过嘌呤霉素筛选并用有限稀释法分离培养出单克隆细胞。提取筛选出的单克隆细胞基因组DNA并对敲除位点附近的DNA片段进行PCR扩增并测序;用Real-time PCR检测细胞株CXCR4基因mRNA表达情况;用免疫印迹法检测CXCR4蛋白质的表达情况。结果 Lenti CRISPRv2-sgRNA重组质粒构建成功;经过基因组DNA片段PCR扩增测序得1株缺失27 bp的稳定敲除CXCR4基因的细胞株;细胞株CXCR4mRNA的表达量低且几乎无CXCR4蛋白质的表达。结论通过CRISPR/Cas9系统获得靶向敲除CXCR4基因的重组质粒,并筛选出稳定敲除CXCR4基因的细胞株。

摘要：目的:探讨主动脉弓部病变中开窗技术的应用对主动脉弓部及弓上分支血管血流动力学的影响。方法:选取2016年11月至2019年5月复旦大学附属中山医院收治的主动脉瓣弓部病变患者10例,均行胸主动脉腔内修复,术中运用开窗技术重建左锁骨下动脉。基于患者术后随访的影像数据,建立个体化的主动脉三维几何模型。运用计算软件,对主动脉三维模型开展数值模拟,评估开窗技术对主动脉弓部及弓上分支血管血流动力学的影响。结果:结合开窗技术的胸主动脉腔内修复术成功率较高(9/10),术后未发生严重并发症,无手术相关死亡,随访期间未发现目标血管丢失。术后开窗支架相对狭窄,在收缩期和舒张期均观察到高速血流;开窗支架进入主动脉弓区域的血流振荡指数增高,表明开窗支架破坏了主动脉弓部的血流稳定;弓上分支血管的血流量分配发生改变,右侧头臂血流增加,左侧头臂血流减少。结论:开窗技术可在胸主动脉腔内修复术中有效重建左锁骨下动脉,但也对主动脉弓部和弓上分支血管血流产生影响;根据数值模拟结果,可对手术方式进行改良,并为手术器械的设计提供参考。

摘要：目的胸主动脉腔内修复术(TEVAR)已成为主动脉病变的标准治疗方式。然而,术中血液动力学的改变仍未受到足够关注,术中并发症的发病机制也尚未厘清。评估术中覆膜支架鞘管的血液动力学影响。方法设计3种具有代表性的理想主动脉病变模型:主动脉瘤、主动脉缩窄及主动脉夹层,利用计算流体力学方法获取术前的血液动力学参数分布。