摘要：依据蛋白质的亲水性、可亲性、柔韧性、抗原性、电荷分布及ＨＰＬＣ滞留系数等六种性质，使用“Ｇｏｌｄｋｅｙ”软件系统给出了ＨＣＶ－ＢＫ各蛋白抗原决定簇预测曲线，共设计、合成１５个多肽片段：Ｐ１（４７５～４９５），Ｐ３（４４９～４６８），Ｐ４（６５８～６６３），Ｐ５（６４５～６６３），Ｐ６（４８４～４８９），Ｐ７（４７５～４８９），Ｐ１５（６５５～６６２），Ｐ１６（２３０～２３７），Ｐ１７（２２５～２３７），Ｐ１８（１２２０～１２４０），Ｐ１９（１６９４～１７３５），Ｐ２４（１２３０～１２４０），Ｐ２５（１４８２～１４９３），Ｐ２６（３８４～３８９）和Ｐ２７（２３５５～２３８９）。发现ＮＳ１区％和ＮＳ４区Ｐ１９有很强的抗原性。用其检测ＰＴ－ＨＣ，阳性率分别为６０％和６３％

摘要：丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因组有显著的异源性和高度的可变性。其中Ｅ２ＨＶ（高变区）认为是宿主识别ＨＣＶ，并且产生免疫压力的靶目标之一。文中设计并合成了三段多肽抗原Ｐ２，Ｐ９和Ｐ１０。抗原性及免疫原性研究结果表明：（１）ＨＣＶ宿主体内存在抗－Ｅ２ＨＶ抗体，但这种抗体是非中和性的，或者是抗体滴度太低。不足以中和ＨＣ病毒抗原；（２）同一基因型的ＨＣＶ抗－Ｅ２ＨＶ抗体有某种共同的结构特点，从而使某一ＨＣＶ病毒株Ｅ２ＨＶ抗原能够与其它病毒株抗－Ｅ２ＨＶ抗体反应，大约有３０％的代表性；（３）丙型肝炎病毒Ｅ２ＨＶ区里碳端３９８～４１２多肽片段可以引起动物免疫应答。

摘要：2021年11月1日,《美国药典》(USP-2021)[1]新收录通则分析方法生命周期(Analytical Procedure Life Cycle),该通则将于2022年5月1日生效。通则在分析方法中引入了生命周期的概念,基于分析质量源于设计(Analytical Quality-byDesign,AQbD)和风险评估管理(Risk Management,RM)等理念,整合以往药典定义的方法确认(validation)、方法验证(verification)和方法转移(transfer)活动,将分析方法的分析目标概要(analytical target profile,ATP)和分析方法设计、鉴定(validation)和应用监控作为一个动态循环的生命周期,从而保证分析方法在整个生命周期中能始终符合预期的目的[2]。

摘要：效价是控制疫苗有效性和批间一致性的关键指标,依据是否使用实验动物分为体内法和体外法。体内法存在动物需求量大、操作费时及检测结果变异大等缺陷,体外替代方法因操作简便、符合3R原则、变异小等优势一直是人们研究的重点,但因替代实验设计和操作复杂并缺少相应指南进展较慢。近年《欧洲药典》10.0版通则增加了“用于疫苗质量控制的体外方法替代体内方法”章节,明确了开展方法替代的考虑要点。本文在《中国药典》和《欧洲药典》收载的体内外效力检测品种及相关变革基础上,解读《欧洲药典》体外替代章节,提出对我国疫苗效价体外替代方法的思考,以期加速相关研究进程,提升我国疫苗质控和监管能力。

摘要：目的为快速、高通量检测HBV“a”决定簇热点突变，制备基因芯片，并进行了初步应用。方法应用HBV基因保守序列设计PCR扩增引物，针对“a”决定簇突变设计简并探针，制备了检测126A、126S、144A、145R、145E、144A＋145R和144A＋145E突变的基因芯片。通过对质粒参考品或样本进行测定，以评价芯片的特异性、灵敏度、重复性和检测劣势株的能力，并对45例乙型肝炎患者的血清样本同时应用基因芯片和PCR产物直接测序法进行检测比较。结果所制备的基因芯片能特异性检测出质粒参考品，灵敏度为5×10^3拷贝／μl。同一样本检测10次，芯片内和芯片间变异系数均小于15％。当劣势株占HBV毒株10％以上时，基因芯片即可检出。芯片法测得45例样本中126A、126S-1和126S-2的阳性率（分别为46．67％、35．56％和24．44％）显著高于PCR产物直接测序法（分别为9．00％、4．44％和2．22％;P值分别为0．000、0．000和0．002），克隆测序验证了基因芯片法的特异性。结论基因芯片法可快速、有效地检测HBV特定位点突变株，为HBV突变的大规模筛查提供了方法。

摘要：目的建立甲型肝炎病毒(hepatitis A,HAV)荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测方法,用于贝类中HAV的检测。方法选择HAV高度保守的5’UTR区设计引物及探针,以HAV质粒为标准品,HAV活病毒为样本,建立HAV qRT-PCR检测方法;验证该方法的特异性、灵敏度、重复性、准确性及中间精密度;采用建立的方法检测HAV活病毒和贝类样本,并与我国贝类HAV检测国标方法(GB/T22287-2008法)进行比较。结果通过14对引物探针分别对HAV质粒(101~108拷贝/μL)检测结果的比较,选择灵敏度最优的Pan1引物,建立了HAV qRT-PCR检测方法(PAN法)。PAN法对CVA16、CVB3、EVA71、PV等11种RNA病毒均无阳性扩增;灵敏度达10 TCID50/mL;检测2.699~5.699 LgTCID50/mL各浓度HAV活病毒的回收率为82.9%~127.0%,单人和双人检测的变异系数分别为3.0%~7.0%和2.6%~8.4%。PAN法检测HAV活病毒的灵敏度(10 TCID50/mL)优于GB/T22287-2008法;两种方法对20份贝类样本的检测结果均为阴性,符合率为100%。结论建立的PAN法具有良好的特异性、灵敏度、准确性、重复性和中间精密度,可用于贝类样本中HAV的核酸定量快速检测。

摘要：目的为预防性疫苗Ⅳ期临床试验提供参考。方法结合相关资料及经验,提出预防性疫苗进行Ⅳ期临床试验时需考虑的要点。结果与结论进行预防性疫苗的Ⅳ期临床试验时,需依据有关的法规认真设计和实施,科学评估疫苗的质量,保证疫苗的安全和有效。

摘要：目的研究乙型肝炎（乙肝）病毒（HBV）“a”决定簇热点突变对乙肝疫苗保护效果的影响。方法根据HBV基因保守序列设计PCR扩增引物,针对“a”决定簇突变设计简并探针,制备检测HBV“a”决定簇16种热点突变的基因芯片,并用克隆测序对芯片检测结果进行验证。基因芯片法检测47对乙肝疫苗阻断失败的母婴配对样本和323例阻断成功的母亲样本。结果克隆测序证明,基因芯片法具有特异性。应用该法检测发现,野生株（阳性率为78．66%）仍为主要流行株,依次为126A（11．27%）、145R（5．76%）、126S-1（5．28%）、126S-2（4．56%）、129H（1．20%）、144A（0．72%）、129R（0．24%）,但126A阳性率显著高于其他突变（P值均＜0．01）。阻断失败组母婴均感染的样本与阻断成功组的126A、126S-1、126S-2和145R检出率的差异无统计学意义。结论现有乙肝疫苗可阻断126A、126S和145R突变株的母婴传播,目前毋需研制针对126和145位点突变的新型乙肝疫苗,但需加强对突变株的流行病学监测。

摘要：分析方法是生物制品质量控制的基础,准确可靠的分析方法能够提升标准制定的科学性。生物制品分析方法具有变异大的特点,更加凸显了对分析方法质量控制的要求。分析方法质量源于设计(analytical quality by design,AQbD)为质量源于设计(quality by design,QbD)在分析方法生命周期管理中的应用。近年随着分析方法开发的相关法规文件不断推出,AQbD已用在药品包括疫苗的分析方法中,主要通过分析目标概要(analytical target profile,ATP)设定、风险分析、实验设计(design of experiment,DOE)和方法验证来获得符合ATP要求的准确度、精密度和专属性等指标,并明确容忍区间、预测区间、方法总变异、方法能力指数和方法误判率等能力指标,为疫苗分析方法的开发和评价提供支持。本文介绍AQbD国内外相关法规文件及其在疫苗中的应用进展,推动AQbD用于我国疫苗质控和评价。

摘要：目前,药品质量管理模式已从“检验控制质量”和“生产控制质量”模式发展为“设计控制质量”模式,强调风险评估、过程控制及持续监测和改进在生产过程中的应用。质量源于设计(Quality by Design,QbD)的理念在治疗性单克隆抗体领域应用较多,但在其他生物制品,特别是疫苗类产品中应用较少,这与疫苗结构复杂、工艺较为传统及质控方法变异度较大等因素有关。加快QbD理念和框架在我国疫苗行业的实施,对提升我国疫苗特别是新型疫苗的质量、安全性和有效性具有重要意义。本文对QbD在疫苗研发中的应用进展作一综述,并分析存在的问题和挑战,以期推动QbD理念在疫苗行业的应用,为进一步提升我国疫苗研发和质控水平提供参考。