摘要：将猪肌生成抑制素编码序列下游 883～ 1 1 2 6 bp按大肠杆菌嗜好密码子进行优化 ,将优化后序列双链分成 1 2个单链片段 (F1 、F2 、F3、R6 、R5、R4 、F4 、F5、F6 、R3、R2 、R1 ) ,采用化学合成方法合成 ,每对相邻互补片段之间有 2 0 bp序列交叉重叠。F1 长 38bp,R1 长 36 bp,其他片段均 4 0 bp长 ,F1 和 R1 片段两端分别加上限制性内切酶 Nco 和 Xho 的识别位点序列。经 PCR扩增出 2 5 4 bp片段 ,该片段与 p MD1 8- T载体连接 ,转化 JM1 0 9感受态细胞 ,所得阳性克隆进行测序分析 ,得到的克隆序列与设计的序列完全一致 ,表明成功地获得了猪肌生成抑制素下游编码序列克隆载体。从阳性细菌中提取质粒 ,经 Nco 和 Xho 酶切 ,回收 2 5 4 bp目的片段 ,定向克隆到 p ET2 8a中 ,转化 DH5α受体菌 ,提取质粒 ,再转化到 BL2 1 (DE3)中 ,成功筛选出阳性克隆。阳性菌经 IPTG诱导 ,通过 SDS- PAGE。