摘要：目的　从刚地弓形虫RH株基因组DNA中扩增出其主要表面抗原 1(SAG1)全长的基因编码序列 ,构建重组原核表达载体并在大肠埃希菌中进行表达 ,为进一步研制弓形虫病免疫诊断试剂盒打下基础。方法　根据弓形虫RH株主要表面抗原SAG1的cDNA序列设计一对引物 ,利用聚合酶链反应 (PCR )技术从RH株弓形虫基因组中扩增出SAG1的全长基因 ,将其克隆到载体pGEX 4T 3中 ,并通过基因测序加以证实 ;重新设计引物将其亚克隆至原核表达载体pET 3 2c中 ,在大肠埃希菌中经IPTG诱导表达。结果　从刚地弓形虫RH株基因组中成功扩增到 10 3 0bp的全长SAG1基因 ,该基因在原核系统中经诱导表达出一分子量约 3 70 0 0大小的融合蛋白 ,表达产物以包涵体的形式存在。结论　SAG1是弓形虫主要的表面抗原 。

摘要：目的构建、表达和纯化刚地弓形虫(Toxoplasmagondii)主要表面抗原1(SAG1)单链抗体S1与绿色荧光蛋白(GFP)的融合蛋白,体外观察其与弓形虫速殖子的特异性结合能力。方法分别设计引物,构建原核表达质粒pET-26b-GFP和pET-26b-GFPS1,测序验证后转化大肠埃希菌BL21(DE3),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,荧光显微镜观察融合基因中GFP的表达情况。用Ni2+螯合柱亲和纯化融合蛋白GFPS1,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测融合蛋白GFPS1。荧光显微镜观察融合蛋白GFPS1与弓形虫速殖子体外孵育后单链抗体S1对弓形虫速殖子的靶向作用。结果测序结果显示,弓形虫SAG1单链抗体S1与GFP的融合基因构建到原核表达载体pET-26b(+)中;IPTG诱导表达后,在荧光显微镜下可观察到***21发出的特异性绿色荧光。SDS-PAGE检测到表达的融合蛋白GFPS1相对分子质量(Mr)约为53000,多以包涵体形式存在。免疫荧光检测可见弓形虫速殖子表膜周围发出特异性的绿色荧光,表明纯化的GFPS1可特异性地结合到弓形虫速殖子表膜。结论弓形虫主要表面抗原1(SAG1)单链抗体S1与弓形虫速殖子表膜有较强的结合能力。

摘要：目的从恶性疟原虫FCC1／HN株基因组中扩增得到环子孢子蛋白(circumsporozoite protein,CSP)的全长编码基因,克隆至原核表达载体pET-32c中进行表达纯化,观察重组环子孢子蛋白对肝细胞的结合能力,探讨其作为原发性肝癌基因治疗的靶向分子的可行性。方法根据恶性疟原虫3D7株环子孢子蛋白的编码序列设计一对引物,利用聚合酶链反应(PCR)技术从恶性疟原虫FCC1／HN株基因组中扩增出CSP的全长编码基因,将其克隆到载体pGEM-T中,通过基因测序加以证实;进一步亚克隆至原核表达载体pET-32c中,在大肠杆菌BL21中用IPTG诱导表达,表达产物用Ni2+螯合柱亲和纯化,采用免疫印迹技术(WB)对纯化的融合蛋白进行免疫反应性检测;采用免疫组化(IHC)技术观察重组环子孢子蛋白对不同组织细胞的结合能力。结果从恶性疟原虫FCC1／HN株基因组中成功扩增到1263 bp的全长CSP基因,该基因在原核系统中经诱导表达出一相对分子质量(Mr)约62×103大小的融合蛋白,表达产物以包涵体的形式存在;通过Ni2+亲和柱纯化获得重组CSP融合蛋白;WB表明,重组CSP融合蛋白能被疟原虫阳性血清特异性识别;免疫组化结果显示重组CSP融合蛋白能够与肝癌和正常肝细胞特异性地结合,与其他组织来源的细胞则未见反应。结论CSP是疟原虫子孢子表面主要的蛋白,重组环子孢子蛋白作为原发性肝癌基因治疗的靶向分子具有一定的潜在应用价值。

摘要：目的建立曼氏裂头蚴感染小鼠动物模型,并观察感染后小鼠血常规及血清中特异性IgG抗体变化。方法从青蛙体内检获曼氏裂头蚴,以口服灌胃法感染昆明小鼠25只(3条/只)。于感染前2 d和感染后第2、7、14、21、28、35、42、49天采集小鼠血液,检测血常规(白细胞总数、红细胞总数、血红蛋白、血小板总数)及血清中特异性IgG抗体(ELISA法);于感染后第49天处死全部小鼠,解剖并仔细查找小鼠体内的曼氏裂头蚴。结果小鼠感染曼氏裂头蚴后,白细胞总数在第2天明显升高;血清中特异性IgG抗体于感染后第14天开始检出,于第21天从全部小鼠检出。在小鼠多个组织器官检出曼氏裂头蚴,其中以皮下肌肉多见。结论成功建立小鼠感染曼氏裂头蚴动物模型,该法造模简单、经济。白细胞及血清中特异性抗体检测可作为曼氏裂头蚴的辅助诊断方法。

摘要：目的了解江苏省曼氏迭宫绦虫宿主感染情况,为曼氏裂头蚴病防控提供科学依据。方法2018—2019年在江苏省随机抽取9个县(市、区)作为调查点。各调查点随机抽取100名常规健康体检者作为调查对象,进行曼氏迭宫绦虫血清学及病原学检查;在野外环境中调查猫、犬等终宿主及剑水蚤等中间宿主曼氏迭宫绦虫感染情况。结果江苏省9个调查点人群曼氏迭宫绦虫感染率均为0(0/900),血清抗曼氏裂头蚴Ig G抗体阳性率为1.22%(11/900);中间宿主剑水蚤原尾蚴阳性率为0.33%(3/900),猫、犬等终宿主粪检曼氏迭宫绦虫虫卵阳性率为1.48%(2/135)。结论江苏省自然环境中存在曼氏迭宫绦虫感染,应加强曼氏裂头蚴病危害和感染途径的健康教育。

摘要：目的建立一种灵敏、特异的痕量检测日本血吸虫毛蚴的PCR方法。方法取感染6～8w日本血吸虫的小鼠肝脏,碾磨后沉淀,孵化并利用间接连续离心法富集毛蚴,采用蛋白酶K-苯酚法提取毛蚴基因组DNA。登陆GenBank查询获得日本血吸虫保守序列18S小亚基单位核糖体脱氧核酸(18SrDNA)基因,利用引物设计软件PrimerPremier5.0和Oligo6自主设计一对引物,建立检测日本血吸虫毛蚴的PCR方法。梯度稀释血吸虫毛蚴基因组DNA进行PCR方法的灵敏性试验,设置阴性对照,PCR产物通过电泳鉴定。结果 PCR扩增日本血吸虫毛蚴得到特异性DNA片段,片段长度为463bp,阴性对照组无扩增产物。PCR法可检测出日本血吸虫毛蚴DNA的最低浓度为62.5pg/μL。结论建立的检测日本血吸虫毛蚴PCR方法灵敏、特异,具有一定的预警作用。

摘要：目的研发羊粪收集袋,在简便易行、避免污染的前提下提高羊粪样本收集的准确性和完整性;改良塑料杯顶管孵化法,使其操作简便规范,具有较强的可比性,以适应羊日本血吸虫病病原学诊断和科学研究的需要。方法基于湖区山羊体形特征,采用棉纱粗平布面料设计缝制一种可固定在羊臀部、可脱卸、可避免尿液污染(粪尿分离)的羊粪收集袋。在进行羊粪塑料杯顶管孵化前,采用机械法代替常规人工捣碎羊粪标本,比较机械捣碎处理对顶管孵化法孵化毛蚴的影响。在塑料杯顶管孵化法顶管与杯盖橡皮圈之间加一滤膜,以阻挡粪渣漂浮物进入顶管,比较薄层脱脂棉滤膜、厚层脱脂棉滤膜、100孔/25.4 mm^2尼龙绢和150孔/25.4 mm^2尼龙绢等4种滤膜对毛蚴孵出观察的影响。结果羊粪收集袋由前腿固定衫、后腿固定衫和粪便袋3部分构成,固定衫主要功能是固定收集袋,使其在羊活动时不移位且能承载重量,粪便袋主要功能是存放粪便。携带粪便收集袋的山羊活动不受影响,所排放粪便均落入袋中,并可按需要随时取用。该袋装卸方便,粪便标本可避免尿液污染,收集袋可在清洗后重复使用。羊粪样本用于塑料杯顶管毛蚴孵化法前,加适量水后采用JYL-C16V型九阳牌料理机,按18 000 r/min搅碎10 s,连续3次,每次间隔5 s,可将山羊粪便标本均匀粉碎,采用该法机械搅碎羊粪对毛蚴孵化无影响。同一份羊粪标本用于塑料杯顶管孵化法时,在顶管与橡皮圈间分别加垫100孔/25.4 mm^2尼龙绢、150孔/25.4 mm^2尼龙绢、薄层脱脂棉滤膜和厚层脱脂棉滤膜后,获得毛蚴总数分别为541、620、344条和211条,表明采用100孔/25.4 mm^2尼龙绢和150孔/25.4 mm^2尼龙绢观察效果均好。结论羊粪收集袋操作方便、适用、可重复使用,可用于山羊血吸虫感染病原学诊断和科学研究;用机械搅碎和150孔/25.4 mm^2尼龙绢改良塑料杯顶管法的相关操作,可提高山羊日本血吸虫病原学检测的方便性和准确性。

摘要：目的建立快速、高效、特异的定量水体中尾蚴的数量和检测水体中日本血吸虫尾蚴残余基因组DNA的方法,来评估水体受日本血吸虫尾蚴污染的程度。方法根据日本血吸虫基因组DNA中的3个多拷贝序列Sjrh1.0(序列号:U92488.1)、18S小亚基单位核糖体核酸基因(18SrRNA)序列(序列号:AY157226.1)和逆转录转座子SjR2的G55A序列(G55A)(序列号:AF412221.1),设计常规PCR引物和实时定量PCR引物,选取较好的靶序列建立SYBR GreenI实时定量PCR方法,绘制尾蚴数的对数与Ct值的标准曲线,并对疫水中日本血吸虫尾蚴残余的基因组DNA进行检测。结果尾蚴数的对数与Ct值的标准曲线有良好的线性关系,相关系数r2为0.918 6,重复性良好。结论本方法特异性高,灵敏,可定量水体中尾蚴数,对疫水检测有一定的预警作用。

摘要：目的了解无锡地区农贸市场青蛙曼氏裂头蚴感染情况,评估感染风险。方法于2016-2017年在无锡地区选取江阴市、宜兴市、滨湖区三个区县,在农贸市场购买青蛙共300只。把青蛙剥皮后,检查和分离寄生于青蛙体内的裂头蚴,同时记录虫体寄生部位和数量。结果市场出售青蛙其中感染裂头蚴的31只,阳性感染率10.33%;共检出裂头蚴52条,平均感染度1.68条/只;三县区青蛙曼氏裂头蚴感染率无明显差异;不同体重大小青蛙曼氏裂头蚴感染率无明显差异;曼氏裂头蚴寄生部位以青蛙肌肉内为主。结论无锡地区农贸市场销售的青蛙存在较为严重的裂头蚴感染,对人群有潜在致病威胁,应采取综合性防治措施加强对曼氏裂头蚴病的防控。

摘要：目的构建弓形虫主要表面抗原1单链抗体S1与爪蟾抗菌肽(magainin)的融合基因,在大肠杆菌中诱导表达,观察纯化的靶向抗菌蛋白抗弓形虫感染的效果。方法根据弓形虫主要表面抗原1单链抗体S1的编码序列设计引物从噬菌粒S1/pIT-2中扩增到S1基因;以其为模板,加入接头抗菌肽序列,采用重叠PCR法扩增得到S1基因与爪蟾抗菌肽的融合基因(S1M),将其克隆到原核表达载体pET-32c中,构建成S1与爪蟾抗菌肽基因的重组表达质粒S1M/pET-32c;测序验证后转化***21,以IPTG诱导表达,用Ni2+螯合柱亲和纯化融合蛋白S1M,SDS-PAGE检测融合基因的表达和纯化的融合蛋白S1M;分别采用体内和体外试验观察纯化的靶向抗菌蛋白抗弓形虫感染效果。结果测序结果表明,成功地将弓形虫主要表面抗原1单链抗体S1与爪蟾抗菌肽的融合基因构建到原核表达载体pET-32c中;SDS-PAGE显示IPTG诱导表达的融合蛋白S1M大小约为43kDa,与预期的大小相一致,以包涵体的形式存在;通过变性条件下Ni2+亲和柱纯化获得S1M重组融合蛋白;体内和体外试验证实,经靶向抗菌蛋白处理过的弓形虫对小鼠的致病能力下降,应用靶向抗菌蛋白的弓形虫感染小鼠的存活时间与对照组相比有明显的提高。结论以抗弓形虫速殖子人源单链抗体作为靶向分子,以爪蟾抗菌肽作为效应分子,构建成功的靶向抗菌蛋白通过体内、外试验证实,具有一定的抗弓形虫感染的作用,虽然还不能完全杀灭弓形虫,但是在弓形虫生物治疗药物的研制方面进行了有益的探索,为弓形虫病的生物治疗提供了新的思路。