摘要：目的:基于流式细胞仪光路系统的硬件配置情况,探讨多色流式细胞术实验方案的优化设计。方法:选用6~8周B6小鼠的骨髓细胞作为实验材料,在已有流式抗体的基础上,通过变更BD AriaⅢ流式细胞仪中的滤光片,分别检测各荧光通道信号的相对变异系数%rCV和荧光强度中位值(median of fluorescence intensity,MFI)以及小鼠骨髓中的造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)、造血祖细胞(hematopoietic progenitor cell,HPC)和多能祖细胞(multipotent progenitor cell,MPP)的活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。结果:通过优化光路系统配置,滤光片变更前后各荧光通道的%rCV无明显差异;HSC、HPC、MPP等细胞亚群在PerCP-Cy5.5通道的MFI(ROS水平)均增大;各亚群PerCP-Cy5.5通道的荧光信号(ROS水平)整体右移,实现了多参数流式分析。结论:在多色流式细胞术实验方案设计中,如相关荧光素抗体搭配受限,可通过灵活搭配使用流式细胞仪中的滤光片,合理优化光路系统的硬件配置,达到完成多色流式细胞术检测的目的。

摘要：目的探讨靶向干扰CIAPIN1基因表达对慢性粒细胞白血病(CML)细胞系K562粒系分化的影响。方法针对CIAPIN1基因设计并构建短发卡RNA(shRNA)真核表达载体,转染K562细胞并作为干扰组,以无关序列shRNA处理的K562细胞作为对照组。采用Real-time PCR及Western blot技术鉴定干扰效率;采用瑞氏染色和电镜分别观测K562细胞形态学和超微结构的改变;采用Real-time PCR方法检测粒系分化标志基因中性粒细胞胞浆因子1(NCF1)、血清黏蛋白1(ORM1)以及粒系分化转录因子CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBPα)、低氧诱导因子1α(HIF1α)mRNA水平的改变;流式细胞术检测K562细胞表面分化抗原CD11b表达的改变;Western blot技术检测ERK1/2、JNK、p38MAPK及Akt磷酸化水平的改变。结果与对照组相比,干扰组的CIAPIN1基因表达被有效抑制(P<0.05);K562细胞的形态和超微结构趋向成熟粒细胞阶段;NCF1、ORM1、C/EBPα及HIF1αmRNA表达水平升高(P<0.05);CD11b表达升高(P<0.01);ERK1/2磷酸化水平升高(P<0.05),而JNK、p38MAPK及Akt磷酸化水平未见明显改变。结论抑制CIAPIN1基因表达能促进K562细胞向成熟的粒细胞阶段分化,ERK1/2磷酸化水平的升高可能参与了该分化过程。