摘要：为了建立一种快速、灵敏、特异的水禽圆环病毒检测方法,试验根据GenBank中已公布的鸭圆环病毒(DuCV)和鹅圆环病毒(GoCV)的Rep基因序列设计3条特异性引物,对扩增条件进行优化,并检验优化后方法的特异性和灵敏性,最后用建立的水禽圆环病毒巢式PCR检测方法对40份疑似水禽圆环病毒感染的病料进行检测。结果表明:水禽圆环病毒巢式PCR方法可成功扩增出719 bp和543 bp的目的片段;优化后的一轮、二轮PCR中退火温度分别为50,56℃,引物加入量均为0.6μL,二轮PCR的模板稀释倍数为1×10^(3)倍。优化后的方法对水禽圆环病毒的检测具有较好的特异性,与鸭甲肝病毒1型(DHAV-1)、鸭甲肝病毒3型(DHAV-3)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)、H5N6亚型禽流感病毒(AIV)、H9N2 AIV、新城疫病毒(NDV)、鸭瘟病毒(DEV)、鹅细小病毒(GPV)及鹅星状病毒(GoAstV)均无交叉反应;该方法的最低检出限达4.04×10^(2)拷贝/μL,分别是一轮、二轮PCR最低检出限的1×10^(4),1×10^(3)倍;利用该方法对肝脏病料进行检测,GoCV的阳性率为60%(12/20),DuCV的阳性率为40%(8/20)。说明试验建立的巢式PCR检测方法可用于水禽圆环病毒的检测。

摘要：从江苏省某肉鸡养殖场发生疑似传染性支气管炎的发病鸡群中分离到1株鸡传染性支气管炎病毒,命名为CK/JS/073/2017。参照GenBank中IBV的核苷酸序列,设计特异性和全长序列引物,应用RT-PCR技术对CK/JS/073/2017分离株的S1基因进行克隆与序列测定,并进行比对分析。结果显示,CK/JS/073/2017的S1基因片段大小为1 635bp,编码545个氨基酸,蛋白裂解识别位点序列为HRRRR,与中国大部分分离毒株相一致。CK/JS/73/2017株与国内外参考毒株核苷酸同源性为64.7%~99.5%,与位于同一基因型的参考毒株间同源性较高,与我国使用的常规Mass型疫苗毒株及其他参考株同源性较低。以疫苗株H120为参照,该分离株S1基因变异程度较大,出现了基因突变、缺失或插入等现象。