摘要：通过对先前研究报道的7个内标准基因的核苷酸序列分析,设计13个扩增区域(扩增子);利用208个普通玉米品种(系)对这13个扩增子进行高通量测序与分析,并对其序列保守性、特异性、检出稳定性及其动态检测范围进行评估,以获得合适的基于二代测序技术定量检测玉米DNA含量或拷贝数的内标准基因扩增子。结果显示,7个内标准基因的13个扩增子在208个玉米样品中的检出率为94.7%~100%,而在水稻、大豆、棉花、白菜等25个非玉米样品中均未被检出,基本符合内标准基因种内高度一致与种间高度特异的标准;种内保守性分析显示E3-UBI-1扩增子不含单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)和插入缺失(insertion-deletion,InDel),而剩余12个扩增子至少含有一个SNP或InDel;稳定性分析结果显示最不稳定的内标准基因扩增子是IVR,最稳定的是ADH1-2;它们的动态检测范围为0.2~200 ng。综合上述结果,ADH1-2与E3-UBI-1比较适合作为二代测序技术平台中定量检测玉米DNA含量或转基因玉米成分的内标准基因扩增子。

摘要：南方水稻黑条矮缩病毒(southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)引起的新水稻矮缩病近年在越南北部和我国南方各省爆发,准确快速地检测病毒是病害预测的关键。本文针对该病毒的S10序列设计了一对新的引物S10F/S10R,利用一步法RT-PCR,对2010年5~8月间湖南省下属各县送来的疑似感染该病毒引起的水稻矮缩病样本进行了检测,结果显示,新引物能有效地区分阳性样品和非阳性样品。同时对PCR产物进行了序列测定,结果表明序列均与已发表的南方水稻黑条矮缩病毒序列(登录号:EU523360和EU784840)达约99%的同源性。还在此基础上构建了系统发育树,发现SRBSDV湖南、广东和海南分离物病毒位于一个相对独立的分支。研究发现相对以往的巢式RT-PCR,本文采用的新引物及一步法RT-PCR能快速检测南方水稻黑条矮缩病毒,简化了操作步骤,缩短了检测时间,适合在SRBSDV检测和病害预测中应用。

摘要：转基因玉米ND207是中国农业大学研发的转mCry1Ab和mCry2Ab基因的抗虫玉米,本研究的目的是建立ND207转化事件特异性定性PCR检测方法。根据研发者提供的引物进行PCR扩增,PCR产物测序分析,获得了5’端旁侧序列262 bp,包括109 bp的载体序列和153 bp的玉米基因组序列, 3’端旁侧序列316 bp,包括76 bp的载体序列和240bp的玉米基因组序列。针对两端旁侧序列设计14条引物,组成25对引物组合进行引物筛选,选中3’端一对最佳引物优化PCR反应体系及反应条件,建立ND207的转化事件特异性定性PCR检测方法, PCR产物片段大小为166 bp。经过测试,该方法的检出限为0.1%,相当于20个拷贝的ND207特异分子片段。国内8家转基因生物安全检测机构对本方法进行了特异性测试、检出限测试和再现性测试,循环验证报告显示:该方法符合国家标准方法的各项要求,可在检测行业推广应用。ND207转化事件特异性定性PCR检测方法的建立,为我国ND207及其衍生品系的安全监管提供技术支撑。

摘要：转基因玉米MON87419是孟山都远东有限公司研发的转化体,转入了dom和pat基因,能够耐受麦草畏和草铵膦两种除草剂。本研究以转基因耐除草剂玉米MON874193′端特异性序列为靶标设计引物和探针,经特异性测试、体系优化、灵敏度测试及检出限(LOD)测试,建立了MON87419的实时荧光PCR定性检测方法。结果表明,该方法能检测出转基因耐除草剂玉米MON87419转化体成分,具有稳定性好、特异性强、灵敏度高的特点,检出限可达0.05%。该方法主要技术参数全部符合相关标准的要求,可为转基因玉米的安全监管提供有效的技术支撑。

摘要：【目的】浙大瑞丰8是杭州瑞丰生物科技有限公司开发的抗虫转基因玉米,于2021年12月获得生产应用安全证书。研究浙大瑞丰8的特异性PCR检测方法,为市场监管和产业化推广提供技术支持。【方法】以浙大瑞丰8转化体外源基因插入端侧翼序列为靶标,在5'端(右侧翼)和3'端(左侧翼)分别设计特异性引物,以与玉米内标准基因zSSIIb一致的标准反应体系和反应程序,对左侧翼和右侧翼各20对引物进行了筛选,得到了特异性高、稳定性好的候选引物,通过改变退火温度和引物浓度这两个关键参数,初步建立了浙大瑞丰8转化体PCR检测方法。【结果】筛选到的浙大瑞丰8 PCR扩增引物RF 8-RB-R4/F1可特异性扩增目标片段265 bp,建立了与玉米内标准基因zSSIIb一致的标准反应体系和反应程序,实现了批量检测的高通量。【结论】建立的特异性定性PCR检测方法稳定性及适应性好,对拷贝数分数为0.1%(约20个拷贝)能稳定检出,可精准、特异地检测出浙大瑞丰8转化体。

摘要：抗逆大豆IND-ØØ41Ø-5已经批准获得我国进口用作加工原料的安全证书,含有外源HaHB4基因和bar标记基因。本研究根据抗逆大豆IND-ØØ41Ø-5转化体5′端和3′端插入位点旁侧序列信息,设计19对引物,结合罗萨里奥农业生物技术学院公司的1对引物,针对20对引物组合利用定性PCR技术进行引物特异性筛选,结果显示5′端的14号引物特异性良好,优化后获得最佳反应体系和反应程序;经测试,该引物特异性好、稳定性高,检出限达0.1%,扩增片段大小248 bp。经8家有资质实验室对本方法的特异性、检出限、重复性和再现性进行验证,各项参数均达到国家标准要求。本研究成功建立了抗逆大豆IND-ØØ41Ø-5转化体定性PCR检测方法,为IND-ØØ41Ø-5转化体在国内的安全监管提供技术支撑。

摘要：利用转基因抗虫耐除草剂玉米MZIR098的5’端旁侧序列信息,设计引物及探针,随后通过qPCR和3D-dPCR平台,建立了玉米MZIR098的转化体特异性双重定量检测方法。经测试后显示,qPCR和3D-dPCR两种检测方法的重复性(相对标准差)均小于25%,符合转基因检测方法相关标准,并且检出限和定量限也无显著差异。上述结果说明2种方法均可满足转基因定量检测的基本需求,可为今后准确高效地检测玉米MZIR098及其产品提供新的参考方法。

摘要：转基因耐除草剂玉米MON87419是由孟山都远东有限公司研发的玉米转化体,能够耐受麦草畏和草铵膦2种除草剂,已向我国申请进口用作加工原料的转基因生物安全证书。本文旨在建立转基因耐除草剂玉米MON87419转化体的特异性定性检测方法,以MON87419转化体特异性序列为靶标,设计一系列特异性引物,进行引物筛选、特异性测试、反应条件优化、灵敏度测试、检出限测试和再现性测试等试验。结果表明,本特异性检测方法的主要技术参数全部符合相关转基因分子检测标准的要求,特异性片段大小为216 bp,品系特异性高,灵敏度低至0.05%,检出限达到0.1%,具有良好的再现性和重复性。本方法的建立可为该转基因品系及其衍生产品的检测和安全监管提供有效技术支撑。

摘要：转基因玉米MON87419是耐受麦草畏和草铵膦两种除草剂的玉米新品系。为了建立转基因玉米MON87419实时荧光定量检测方法,本研究根据转基因玉米MON87419的3′端旁侧序列信息设计引物和Taqman探针,经引物筛选、PCR体系优化、特异性检测、标准曲线建立、正确度及精密度检测和定量限测试等试验,表明该方法能特异、定量检测出转基因玉米MON87419转化体成分,可以对0.1%以上的MON87419转基因成分进行准确定量。本研究结果可为该转基因玉米品系的安全监管提供有效技术支撑。

摘要：转基因大豆SHZD32-1是由我国自主研发的耐除草剂抗性品系。为给该品系转基因生物安全监管提供技术支撑,本研究开发其转基因成分的快速便捷式检测方法,主要基于环介导等温扩增技术,设计并筛选该转化体最佳特异性LAMP引物组,优化扩增温度和时间,并分析灵敏度、特异性及稳定性,建立SHZD32-1的LAMP检测体系。结果显示:在62~64℃条件下反应40~60 min扩增效果最佳;灵敏度标准达到质量分数0.05%,高于普通PCR(0.1%);特异性和稳定性较高,检测结果同普通PCR扩增一致。转基因大豆SHZD32-1成分LAMP技术不需要特殊仪器,检测时间短,结果可视化,灵敏度、特异性和稳定性高,有望用于转基因耐草甘膦大豆SHZD32-1的现场快速检测。