摘要：背景:阿尔茨海默病是一种老年神经系统退行性疾病,神经元凋亡被认为是其可能的发病原因之一,体外细胞培养是研究其凋亡机制的常用方法。目的:观察一氧化氮供体硝普钠对体外培养的海马神经元cpp32基因表达的影响。设计:随机对照动物实验。单位:广东医学院生物化学与分子生物学研究所。材料:实验在广东医学院生物化学与分子生物学研究所完成,实验动物为新生(出生24h以内)SD大鼠。方法:取大鼠海马神经元进行原代培养,采用终浓度分别为0,25,50,100,200,400μmol/L的硝普钠处理海马神经元24h,用反转录聚合酶链反应检测mRNA表达变化,Westernblot检测蛋白表达的变化;再用终浓度分别为0,25,50,100,200μmol/L的硝普钠处理海马神经元12h,用CPP32活性检测试剂盒检测CPP32酶活性。主要观察指标:cpp32mRNA表达、CPP32蛋白表达及CPP32酶活性检测。结果:随着硝普钠剂量的增加,cpp32mRNA表达无改变;但CPP32酶原被裂解活化,从硝普钠50μmol/L开始,酶活性显著增加,为对照组的3.02倍,100μmol/L达最大值,为对照组的3.47倍。结论:硝普钠不增加cpp32mRNA的表达,但可诱导CPP32酶原的裂解,使CPP32活化。

摘要：目的应用改良5′cDNA末端快速扩增聚合酶链反应(RACE)筛选扇贝抗菌肽基因,寻找基于基因序列同源性的双壳类抗菌肽(AMP)的筛选方法。方法 TRIzol法提取扇贝血淋巴中总RNA。根据贻贝抗菌肽的保守序列设计基因特异性简并引物,进行改良5′RACE钓取可能防御素基因cDNA的5′端序列、AT克隆、DNA测序和同源性分析。结果采用改良5′RACE从扇贝血淋巴RNA中得到多个未知基因的cDNA 5′端序列,挑选600bp以下的基因片段进行AT克隆和DNA测序后得到3个插入片段序列,其长度分别为257、275和511bp。通过BLAST程序搜索GenBank核酸数据库,未发现与之高度同源的基因。结论从扇贝血淋巴中获得的3个5′端cDNA序列可能属于新的基因。应用改良5′RACE能钓取含防御素保守序列的新基因片段,由此表明此方案具有可行性。

摘要：目的应用改良3′ cDNA末端快速扩增PCR法(rapid amplification of cDNA ends,RACE)筛选扇贝抗菌肽基因。方法设计M13和T7启动子分别修饰的基因特异性引物(gene special primer,GSP)、锚定引物,提取扇贝血淋巴总RNA进行改良3′ RACE和5′ RACE,获得cDNA准全长序列并在GenBank中进行同源性比较。结果从扇贝血淋巴中获得3个cDNA的3′端序列基因和1个准全长cDNA(544bp),在GenBank中未发现与之高度同源的基因。结论从扇贝血淋巴中获得的1个准全长cDNA、3个cDNA的3′端序列可能属于新基因。应用改良3′ RACE能钓取含抗菌肽保守序列的新基因片段,该方法可行。

摘要：从患溃疡的黄喉拟水龟病灶中分离到一株病原菌SG24。对菌株SG24进行了常规生理生化测定和ATBExpression半自动细菌鉴定仪鉴定,并测定16S rRNA序列,分析其与相关细菌相应序列的同源性,构建了系统进化树。普通细菌学方法结果显示菌株SG24为黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens)。以沙雷氏菌属的16S rRNA基因序列设计一对引物进行PCR扩增,获得了菌株SG24大小约950 bp的16S rRNA部分基因片段,测序结果显示菌株SG24与黏质沙雷氏菌同类,与已登录的黏质沙雷氏菌(***207558)的16S rRNA同源性大于99%。综合以上分类鉴定结果,确定菌株SG24属于沙雷氏菌属的黏质沙雷氏菌。药物敏感试验结果表明:菌株SG24对链霉素、庆大霉素、壮观霉素、强力霉素、卡那霉素、阿米卡星、诺氟沙星、氧氟沙星和复方新诺明敏感。