摘要：【背景】沙门氏菌是世界上最常见的食源性致病菌之一,全球每年沙门氏菌中毒事件居细菌性中毒事件首位。【目的】建立反转录-环介导等温扩增(Reversetranscriptaseloop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)技术特异性检测沙门氏菌。【方法】针对沙门氏菌特异保守invA基因设计多组引物,通过对引物筛选和反应条件优化,建立了检测沙门氏菌的实时荧光RT-LAMP方法。利用沙门氏菌及其人工污染脱脂乳样品,研究了方法的特异性和灵敏性,并与RT-PCR (Reverse transcription polymerase chain)方法的灵敏度进行比较。【结果】等温65°C条件下30min内可完成RT-LAMP反应。利用该方法检测5株沙门氏菌均为阳性,其余21种检测菌株为阴性。在人工污染脱脂乳样品的检测中,灵敏度达到60 CFU/g,比RT-PCR方法高100倍。【结论】建立的实时荧光RT-LAMP方法将为沙门氏菌现场快速检测提供有力手段。

摘要：反转录-环介导等温扩增(reverse transcriptase loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)技术是以RNA为检测模板的扩增反应。针对金黄色葡萄球菌特异保守nuc基因设计多组引物,通过对引物筛选和反应条件优化,建立了检测金黄色葡萄球菌的实时荧光RT-LAMP方法。利用该方法对菌株特异性、纯培养金黄色葡萄球菌灵敏度和人工污染脱脂乳样品灵敏度进行检测。等温65℃条件下,30 min内完成RT-LAMP反应。该方法具有较强的菌株特异性,对纯培养金黄色葡萄球菌灵敏度检测限为20 fg/μL,在人工污染脱脂乳样品的检测中,灵敏度达到230 CFU/g。建立的实时荧光RT-LAMP方法可以为金黄色葡萄球菌现场快速检测提供有力手段。

摘要：建立了反转录-环介导等温扩增技术的志贺氏菌快速检测方法。针对志贺氏菌特异保守基因ipa H设计多套引物,建立优化了的反应体系,并评价其准确性、特异性、灵敏度。以人工污染脱脂乳样品比较RT-LAMP与RT-PCR的灵敏度。结果表明,在65℃等温条件下,RT-LAMP反应可在30 min内完成。在活菌/损伤菌模型中,该方法表现出比国标法更好的准确性。在23株细菌标准菌株中仅对4株志贺氏菌有特异性检出。志贺氏菌RNA模板的检测灵敏度为7 fg/μL。人工污染脱脂乳样品检测灵敏度达到40 CFU/g,比RT-PCR方法高出2个数量级。表明所建立的志贺氏菌RT-LAMP扩增方法可以准确的检测志贺氏菌,同时具有快速、特异、灵敏的优势,可用于志贺氏菌的快速筛查和现场监控。

摘要：建立反转录环介导等温扩增(Reverse transcriptase loop-mediated isothermal amplification RT-LAMP)方法特异性检测大肠杆菌O157。针对大肠杆菌O157的特异性保守rfb E基因设计多组引物,通过对引物筛选和反应条件优化,建立了检测大肠杆菌O157的实时荧光RT-LAMP方法。利用大肠杆菌O157及其人工污染脱脂乳样品,研究了方法的特异性和灵敏度,并与r RTPCR(Real-time fluorescent quantitative reverse transcription polymerase chain reaction)方法的灵敏度进行比较。结果显示,等温65℃条件下,30 min内能完成RT-LAMP扩增反应。所建立的实时荧光RT-LAMP方法特异性强,除了2株大肠杆菌O157以外其余菌株均未产生特异性扩增反应。同时该方法灵敏度高,对人工污染脱脂乳样品检测灵敏度能达到20 CFU/g,比r RT-PCR方法高10倍。建立的实时荧光RT-LAMP方法将为大肠杆菌O157现场快速检测提供有力手段。

摘要：造成商业银行经营风险的原因有外部与内部两方面.外部风险主要是指社会因素造成的风险.第一类是由于政策体制所造成的政策风险.第二类是由于市场变化所引起的市场风险.如房地产、股票、证券、期货等产品价格波动,市场利率和汇率变动而引起银行风险.第三类是由于用恶意欺诈或信用等级转移所造成的信用风险.商业银行经营中的内部风险分为以下几种:一是由于指导思想偏差或制度缺位所引发的制度风险.二是违规操作或过失造成的操作风险.三是由于人员道德素质低下所引发的道德风险.外部银行风险一般具有难以预测性,但可以通过转变思想、转换机制、内部练功、提高素质、加强内部控制来积极防范和化解风险.实践证明:银行的经营风险主要来自于内部.防范银行经营风险,内部控制是根本的、主要的.抓好了内部控制,就抓住了防范银行经营风险的关键环节.

摘要：为实现婴幼儿配方乳粉中阪崎肠杆菌快速检测,建立等温荧光扩增方法特异性检测阪崎肠杆菌。针对阪崎肠杆菌特异性保守ompA基因设计3套引物,通过引物筛选和反应体系优化,建立阪崎肠杆菌快速检测的实时荧光环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法。以人工污染方式检验该方法在乳粉中阪崎肠杆菌检测灵敏度和稳定检测限,并对比实时荧光LAMP法和国标法在48份市售婴幼儿配方乳粉中的实际检测效果。结果显示,筛选ompA-2引物扩增效率最优,且与常见食源性致病菌无交叉反应;建立的实时荧光LAMP法对人工污染乳粉样品中的阪崎肠杆菌检测灵敏度、稳定检测限分别为10^2 cfu/g和10^3 cfu/g;48份市售乳粉样品进行增菌12 h,实时荧光LAMP法检测结果与传统国标培养结果一致。建立的实时荧光LAMP方法将为阪崎肠杆菌快速检测提供有力手段。

摘要：建立一种可快速检测单增李斯特菌的反转录-环介导等温扩增方法。针对单增李斯特菌的李氏溶血素基因(hly)设计多组引物,经引物筛选和配比优化,建立检测单增李斯特菌的实时荧光RT-LAMP方法,并通过菌株特异性、灵敏度和人工污染脱脂乳样品中的检出限对该方法进行评价。该方法特异性良好, 26株菌株中仅三株单增李斯特菌检出阳性;检测灵敏度高,对单增李斯特菌的菌悬液灵敏度为10~1 CFU/mL,是RT-qPCR方法检测灵敏度的10倍。人工污染样品直接检测的检出限为10~3 CFU/mL,而对样品增菌16 h后,单增李斯特菌的检出限提高到10~0 CFU/25 mL。所建立的RT-LAMP方法可以快速、准确地检测单增李斯特菌,操作简便,适合应急和现场监测使用。

摘要：为建立能够同时检测乳粉中沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的二重环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法。针对沙门氏菌invA基因、金黄色葡萄球菌nuc基因保守区域设计LAMP引物,优化引物浓度,并通过熔解曲线分析判断扩增靶标来源,建立同时检测沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的二重LAMP检测方法。结果表明,当沙门氏菌与金黄色葡萄球菌引物浓度比为3∶1时,建立的二重检测体系扩增效率最佳;该方法特异性强、灵敏度高,对6株目标菌株和9株非目标菌株进行检测,未产生任何假阳性和假阴性结果,对2种食源性致病菌的检测灵敏度均达到102 fg/μL;根据熔解曲线中的退火温度可准确判断目标菌株,实现不同菌株的有效区分。建立的二重LAMP方法可用于乳制品企业大规模乳粉样品中沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的现场快速筛查。

摘要：为实现啤酒及啤酒生产中短乳杆菌的快速筛查,建立实时荧光环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法特异性检测短乳杆菌。通过多序列分析比对,选择短乳杆菌特异性基因序列设计3套引物。经引物筛选和反应温度优化,建立快速检测短乳杆菌的实时荧光LAMP方法,并以车间关键控制位点验证方法的适用性。结果显示,1号引物组能够在等温65 ℃、30 min内完成实时荧光LAMP检测。反应特异性强、灵敏度高。对4株目标菌株和18株非目标菌株进行检测,未出现假阳性和假阴性结果;纯菌液灵敏度可达10^(2) cfu/mL,优于同期实时荧光PCR灵敏度10倍。车间关键控制污染点检测结果与传统培养法及测序结果相符。建立的实时荧光LAMP方法将为啤酒及啤酒生产中短乳杆菌快速筛查提供有力支持。

摘要：本文重点对大型房式仓的施工、长期储粮应用、机械通风效果、仓体结构等进行了综合验证 ,结果证明