摘要：目的观察抑制人脐静脉内皮细胞系ECV304细胞内内皮高表达脂多糖相关因子1（endothe-lial-overexpressed lipopolysaccharide-associated factor 1,EOLA1）基因表达后细胞生长的变化。方法构建EGFP-EOLA1融合蛋白表达载体pEGFP-N2/EOLA1,转染ECV304细胞,G418压力筛选获得稳定表达株;设计靶点特异性的寡核苷酸,连接到经BamHⅠ和HindⅢ酶切线性化的pSlincer3.1/H1质粒上。转染重组质粒到稳定表达EGFP-EOLA1融合蛋白的ECV304细胞,检测靶基因的抑制情况,观察EOLA1表达被抑制后细胞生长的改变。结果抑制EOLA1表达后ECV304细胞生长明显减慢。结论EOLA1基因在细胞内参与了细胞生长的调控。

摘要：目的设计和构建新基因内皮高表达脂多糖相关因子1(EOLA1)诱导表达载体,建立EOLA1强制表达模型,观察其对细胞增殖的影响。方法逆转录聚合酶链反应扩增EOLA1开放阅读框片段,引入NoⅠt和XhoⅠ酶切位点,定向亚克隆入可调控真核表达的载体pOPRSVⅠ,测序验证后共转染pOPRSVⅠ-EOLA1和pCMVLacⅠ质粒于ECV304细胞,经潮霉素和G418筛选,获得稳定转染细胞株。对异丙硫半乳糖苷(IPTG)诱导和非诱导的稳定转染细胞株进行计数,绘制细胞生长曲线。结果成功构建了EOLA1可调控真核表达载体pOPRSVⅠ-EOLA1。诱导后第4天,EOLA1稳定表达的ECV304细胞数量为(44±17)×104个,显著多于未诱导细胞的数量(27±11)×104个(P<0.01)。结论强制高表达EOLA1蛋白具有促进ECV304细胞增殖的作用。

摘要：目的　构建人类新基因内皮高表达脂多糖相关因子 1(EOLA1)特异性的小干扰RNA表达载体 ,并初步验证其对靶基因的抑制作用。方法　构建绿色荧光蛋白 (GFP) EOLA1融合蛋白表达载体pEGFP N2 /EOLA1,并转染人ECV30 4细胞株 ,G4 18压力筛选获得稳定表达株 ;针对靶基因EOLA1,设计靶点特异性的寡核苷酸 ,插入pSlincer3.1/H1质粒。转染重组质粒到稳定表达GFP EOLA1融合蛋白的ECV30 4细胞 ,通过观察转染细胞绿色荧光的强弱和Westernblot实验检测靶基因的抑制情况。结果　获得了稳定表达GFP EO LA1融合蛋白的细胞株 ,构建的小RNA干扰质粒siEOLA1能够抑制靶基因EOLA1的表达。结论　成功构建了针对EOLA1基因的siR NA质粒 ,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。

摘要：目的　设计和构建人类新基因人内皮高表达脂多糖相关因子 1(endothelium overexpressedlipopolysaccharide as sociatedfactor1,eola1)特异性的小干扰RNA表达载体sieola1,建立eola1下调表达模型 ,观察eola1下调表达对细胞增殖的影响。方法　设计靶点特异性的寡核苷酸 ,连接到经BamHⅠ HindⅢ酶切线性化的pSlincer3 .1 H1质粒上 ;转染重组质粒到ECV3 0 4细胞 ,通过定量RT PCR实验检测靶基因的抑制情况 ;对转染sieola1质粒的细胞进行细胞计数 ,并应用流式细胞仪观察细胞周期的变化。结果　构建的小RNA干扰质粒sieola1转染ECV3 0 4细胞能够抑制靶基因eola1的表达 ;细胞计数和流式细胞仪检测结果显示eola1表达抑制后 ,细胞生长周期延长。结论　成功构建了针对eola1基因的siRNA质粒 ;细胞计数和流式细胞仪检测结果初步确认eola1具有抑制ECV3 0 4细胞增殖的作用。

摘要：背景:国外动物实验表明体外扩增自体骨髓间充质干细胞移植治疗糖尿病足效果较好。目的:观察自体骨髓间充质干细胞体外扩增后患肢移植的效果和安全性。设计:随机对照临床观察。对象:解放军第三军医大学西南医院2006-10/2008-10住院确诊的糖尿病足患者40例,男22例,女18例,年龄(64.3±12.7)岁,按wagner分级2级8例,3级18例,4级14例。按查表法随机分为细胞移植组22例,常规治疗组18例,实验经医院伦理委员会讨论批准。方法:常规治疗组给予常规降糖、降压、调脂、抗感染、抗凝、营养神经、扩张血管等药物治疗,局部常规换药,有坏疽者行截趾治疗;细胞移植组在常规治疗的基础上,按密度梯度离心和贴壁法分离制备骨髓间充质干细胞悬液,经流式细胞仪鉴定、染色体检测、细胞悬液皮试后,予肌肉注射法行扩增后自体骨髓间充质干细胞移植。主要观察指标:细胞移植后1个月两组患者治疗效果的比较,鉴定可能不良事件和副反应。结果:移植后1个月,细胞移植组患者肢体疼痛、冷感、间歇性跛行均有所改善,踝肱指数明显升高,双下肢血管显像血流灌注有所增加,与常规治疗组比较差异均有显著性意义(P<0.01)。移植后3个月随访患者均无异常症状体征出现,血、尿、便常规检测正常,心电图和肝肾功能无特殊改变,出凝血时间正常。结论:体外扩增自体骨髓间充质干细胞移植患肢治疗糖尿病足简便、有效、安全。

摘要：目的构建内皮细胞高表达脂多糖相关因子1(EOLA1)基因启动子的报告基因重组质粒,为EOLA1启动子的分析鉴定奠定基础。方法提取人内皮细胞基因组DNA,设计引物克隆EOLA1基因上游不同长度的基因片段,插入到含荧光素酶报告基因的载体pGL3-Basic中,经限制性内切酶酶切鉴定、测序。结果成功构建了3种含有不同长度EOLA1上游基因的pGL3-EOLA1-Luc荧光素表达质粒,形成了系列的EOLA1启动子重组体。结论建立的不同长度EOLA1上游基因的报告基因系统为EOLA1启动子的活性分析奠定了基础。