摘要：α-L-鼠李糖苷酶是特异性切割末端含α-L-鼠李糖的天然化合物的一类糖苷水解酶,该酶在食品、医药、化学等行业都有广泛的应用。本研究旨在利用保守氨基酸基序结合PCR驱动的宏基因组学方法,从提取的健康人体粪便宏基因组DNA中获得新型细菌源α-L-鼠李糖苷酶基因。通过对CAZy数据库GH78家族中193条细菌源α-L-鼠李糖苷酶氨基酸序列进行多重序列比对,首次将α-L-鼠李糖苷酶家族分为3个亚家族,并确定了其中两个亚家族的两对保守氨基酸基序。基于保守基序氨基酸序列设计简并引物,PCR扩增保守基序间基因片段,对PCR产物克隆测序,结果获得12条α-L-鼠李糖苷酶基因片段,对其编码的氨基酸序列在Gen Bank数据库进行Blast序列比对,其中两条基因片段的氨基酸序列一致性仅为52%,一条为73%,其余9条在94%以上。根据Gen Bank数据库中序列一致性94%以上片段对应全长基因序列设计上下游引物,以人体粪便宏基因组DNA为模板,扩增获得3条α-L-鼠李糖苷酶全长基因,并将其克隆于载体p ET-28a,在*** BL21(DE3)内进行异源表达,目的蛋白多以包涵体形式存在于沉淀中,少量以可溶性形式存在于上清中。人体肠道细菌宏基因组为新型α-L-鼠李糖苷酶基因发现提供了潜在的基因资源库,基于保守氨基酸基序驱动的宏基因组学方法,从人体肠道以及环境宏基因组中直接获取新酶基因是可行的。

摘要：当下阶段中国越来越重视自主技术研发,中国的生产制造技术已经具备了完善的体系,特别是化工工艺设计研发和生产加工都获得了充分的发展,这些为国内工业体系的壮大提供了条件。国内化工工艺生产领域涉及到原材料运输、处理等生产加工环节。在工艺产品中危险化工工艺产品比较特殊,其危险性很高,有些产品的原材料是有毒有害的,对人体的伤害较大,还有的产品属于易燃、易爆物质,这都导致危险化工工艺产品在运输和生产加工过程中发生安全事故的概率很大进而造成经济损失和社会危害。基于此,要明确危险化工工艺生产过程中可能出现的危害,树立安全观念,将各种安全管理制度落实到位,这样才能保证危险化工行业的后续发展。