摘要：【目的】利用CRISPR/Cas9系统构建稳定敲除anxa6基因的Caco-2细胞株,为研究大肠杆菌O157:H7效应蛋白EspF与宿主膜联蛋白A6(ANXA6)相互作用及其致病机制奠定基础。【方法】根据CRISPR/Cas9靶向原理设计并合成3个特异性识别anxa6基因的向导RNA(single guide RNA,sgRNA),基于LentiCRISPRv2载体构建LentiCRISPRv2-sgRNA重组质粒,转入293T细胞中,制备sgRNA-Cas9慢病毒,将慢病毒感染Caco-2细胞,经嘌呤霉素筛选阳性细胞,有限稀释法分离培养单克隆细胞,提取单克隆细胞基因组DNA,并对敲除位点附近的DNA片段进行PCR扩增,测序并进行脱靶效应评估;免疫印记法检测ANXA6蛋白表达情况,细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK8)试剂盒检测细胞增殖能力,免疫荧光法检测细胞紧密连接分布情况。【结果】Western blotting及序列测序表明anxa6基因敲除单克隆细胞构建成功;脱靶效应评估结果显示预测的10个脱靶位点均无脱靶现象;基因敲除对细胞增殖能力无明显影响;免疫荧光结果显示,Caco-2及Caco-2anxa6‒/‒细胞紧密连接蛋白ZO-1均沿细胞膜连续分布,结构完整,转染EspF质粒后出现分布不完整、缺口等现象。【结论】成功构建anxa6基因稳定敲除的Caco-2细胞株,初步探索ANXA6蛋白在紧密连接分布中的作用,为进一步研究大肠杆菌O157:H7通过EspF-ANXA6互作介导宿主肠屏障损伤分子机制提供技术支撑。

摘要：机器人手术系统凭借微创、精细、灵活、无震颤等优势,在多个外科领域不断得到普及应用.然而,现有的机器人手术系统尚未充分发挥人和机器各自的优势,在智能化交互方面的表现有待提高.因此,文中首先从系统科学的角度分析机器人手术系统中交互关系的发展,并从多方面提出当前人机交互的不足.然后,构建面向机器人手术系统的“人-机-环”信息流框架,以机器人辅助乳内动脉获取手术场景为例,梳理“人-机-环”各部分之间的复杂交互.最后,基于“人-机结合”理论,结合构建的“人-机-环”信息流框架,提出以“人机融合智能共进”为目标的新一代机器人手术系统的设计思路,为实现更安全高效的机器人微创外科手术目标提供借鉴.

摘要：采用不同的退火和调质工艺对摊铺机叶片35CrMoVA进行热处理,并进行了退火组织、耐磨性、耐高温腐蚀性和抗热疲劳性测试与分析。结果表明,其热处理工艺方案优选为:先进行(890±10)℃保温5 h后空冷的退火处理,再进行(870±10)℃保温2 h再油冷至(350±10)℃保温30 min后空冷的淬火处理,最后进行(560±10)℃保温4 h后空冷的回火工艺。

摘要：翻开中国现代散文史，散文家分门别类，作品异彩纷呈，大都形成了自己的独特的艺术风格，朱自清先生就是这些散文大家中非常杰出的一位。笔者选用其名篇《背影》来探讨其中的艺术特色。

摘要：目前陶瓷熔块釉浆从制釉车间运输到釉线车间生产线是采用桶装、人力或电动车拉釉的方式,釉线车间到制釉车间一般都有比较长的一段距离,且釉浆需求量也很大,每日往返拉釉次数多,劳动强度大,且存在安全隐患,易引起安全事故。由于陶瓷熔块类釉浆具有易沉淀固化的特性,当采用管道长距离输送时,极易堵塞管道。为了实现陶瓷熔块釉浆长距离简道输送,本文首先针对熔块釉浆特性进行研究,然后对釉浆在管道内的流动进行流体力学分析,最后设计了一种长距离陶瓷釉浆输送系统。该系统有效解决了易沉淀熔块类釉浆难以用管道长距离输送的问题;同时该管道系统全程釉浆在管道内与外界完全隔离,避免了釉浆在输送过程中的污染。长距离陶瓷釉浆输送系统的使用大幅度减少了工人劳动强度,节省了人力成本,减少了釉浆损耗,减少了机物件损耗,该系统应用效果显著。

摘要：杨嗣昌在山水旅游文学作品中表现出来的观赏艺术是十分丰富的。主要有动中取静,静中有动;由远到近,远近映衬;移情交感,虚实相生等等,这些经验对提高今天人们的旅游质量很有借鉴价值。

摘要：杨嗣昌在旅游文学创作中,善于借助传统艺术中的“诗情”与“画意”,将自己对山水风光的一片痴情倾注到诗文之中,从而创造出让人心旷神怡的艺术境界。

摘要：杨嗣昌旅游文学成就的取得 ,同他个人的志趣、学养和艺术素质分不开。兼济天下与独善其身的志趣、四方为官与积岁林居的经历 ,履险探奇与酒兴书情的爱好 ,构成了他作为一个杰出旅游文学家的个人特质。

摘要：我国科学技术的进步带动了机械行业的发展。目前越来越多的新工艺、材料和方法被运用在工程机械产品设计中,为了使现代设计方法能够在工程机械产品的市场中存在立足之地,除了实现系统功能外,还要针对机械的其它要求进行设计。