摘要：目的通过响应面法优化富含车前子苷的车前草黄酮提取工艺,并探究车前草黄酮对过氧化氢(H_(2)O_(2))损伤的L02细胞的保护作用及其作用机制。方法通过单因素研究乙醇浓度、提取温度、液料比对车前草黄酮得率及其中车前子苷转移率的影响,在此基础上使用Central-Composite中心组合试验设计和响应面分析法筛选出车前草黄酮提取得率最高,车前子苷转移率最大的提取条件。通过测定该车前草黄酮对过氧化氢诱导的人正常肝细胞L02存活率、细胞凋亡、线粒体膜电位的影响,及其对L02细胞丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化物歧化酶(SOD)含量,HO-1、Nrf2、SOD蛋白表达量的影响来探究车前草黄酮对过氧化氢损伤的L02细胞的保护作用。结果研究结果表明,提取温度80℃、乙醇浓度65%、液料比为15∶1时,提取得到的车前草黄酮得率和车前子苷转移率均最大,分别为1.82%和35.01%。该条件下提取得到的车前草黄酮在25~100μg·mL^(-1)内可明显降低过氧化氢损伤的L02细胞的凋亡率(P<0.001),降低其线粒体膜电位损伤程度(P<0.001),增加细胞内SOD和GSH的表达量(P<0.001),降低细胞中MDA含量(P<0.01,P<0.001)。此外,该车前草黄酮可以调节过氧化氢损伤的L02细胞中HO-1、Nrf2、SOD的表达量,降低过氧化氢损伤肝细胞中HO-1、Nrf2蛋白表达水平,并增加细胞中SOD蛋白的表达量(P<0.05,P<0.01)。结论使用响应面法筛选出的车前草黄酮提取工艺操作简便,关键有效成分车前子苷的含量丰富,可为车前草黄酮的实际生产提供参考。该方法提取得到的车前草黄酮可降低过氧化氢损伤的肝细胞的氧化应激水平,对L02细胞具有一定的氧化损伤保护作用,研究结果可以为车前草黄酮作为护肝保健品的开发应用奠定基础。