摘要：目的探讨ｃｅｒｂＢ２特异性核酶对胃癌细胞恶性表型的影响。方法根据计算机设计的人癌基因ｃｅｒｂＢ２特异性核酶ＲＺ１，合成ＲＺ１基因并构建其真核表达载体ｐＤＯＲＲＺ１，在ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥＴＭ的介导下转染胃癌细胞ＳＧＣ７９０１。流式细胞仪分析转染的胃癌细胞ｃｅｒｂＢ２产物Ｐ１８５的表达。在裸鼠体内观察转染胃癌细胞的致瘤性。结果在ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥＴＭ的介导下ｐＤＯＲＲＺ１成功地转染了胃癌细胞ＳＧＣ７９０１，经Ｇ４１８筛选出单克隆并称为ＳＧＣ／ＲＺ１。其蛋白产物Ｐ１８５的表达率被抑制达６２．７％；生长速度被抑制达５５％；在裸鼠体内的成瘤时间明显延迟，所成肿瘤的体积亦较对照组明显为小，表明其致瘤性明显减弱。结论ｃｅｒｂＢ２特异性核酶ＲＺ１对胃癌细胞的恶性表型有明显逆转作用。为胃癌的基因治疗提供了一个新的选择。

摘要：目的构建ｃｅｒｂＢ２特异性核酶（ｒｉｂｏｚｙｍｅ）基因及其底物基因的体外转录载体并探讨其体外切割作用。方法在计算机设计的核酶ＲＺ１基因的３′端加上新的限制性酶切位点ＥｃｏＲＶ，先合成ＲＺ１基因并将之与其底物分别克隆入体外转录载体ｐＧＥＭ３Ｚｆ（－），经用ＥｃｏＲＶ快速初选出含有ＲＥ１基因重组子并测序鉴定。体外转录物用３２Ｐ标记。体外切割作用在Ｍｇ＋＋的存在下，３７℃反应１小时，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，放射自显影后经图像分析计算出切割率。结果用ＥｃｏＲＶ筛选很快鉴定出了含有ＲＥ基因的重组子并命名为ｐＧＥＭ３ＺＲＺ１，自动测序证实合成的核酶基因序列正确并已被准确克隆入ｐＧＥＭ３Ｚｆ（－）的Ｔ７启动子。ＲＺ１的靶基因片段也被插入ｐＧＥＭ３Ｚｆ（－）的ＳＰ６启动子下。经体外转录出核酶ＲＺ１及靶ＲＮＡ后，体外切割反应１小时，７９．３％的靶ＲＮＡ即被切开。结论ｃｅｒｂＢ２特异性核酶ＲＺ１在体外有良好的切割活性，该实验为进一步研究其在肿瘤基因治疗中的作用奠定了基础。

摘要：噬菌体表面呈现技术作为一种揭示蛋白质相互作用的快捷有效工具，已受到广泛重视，并在抗原表位的确定及多肽疫苗的设计中显示出优势〔1,2〕。噬菌体随机肽文库是基于上述技术而构建的。噬菌体其被认为是配体的“万能库”，这些配体不一定和天然配体完全相同，但能模拟天然配体与受体的结合特性。因此，在抗原表位-抗体的识别研究中，可以从肽库中直接筛选出能和抗体结合的表位，这些表位既可以是线性表位，也可以是模拟的构象性表位。

摘要：目的　探讨胃癌局部细胞因子表达的特点 ,为胃癌免疫治疗提供依据。方法　以相应非癌性黏膜组织为对照 ,采用高敏感放射性标记半定量RT PCR技术 ,分析胃癌患者癌组织中纯化的CD+ 4、CD+ 8T细胞亚群及上皮细胞的细胞因子表达谱。结果　胃癌组织与非癌性黏膜组织相比 ,CD+ 4和CD+ 8T细胞亚群中均表现为Th2 型细胞因子表达明显增加 ,Th1型细胞因子表达降低。其中癌组织CD+ 8T细胞的IL 6、IL 8和TNF α的水平显著高于非癌性黏膜组织 (P =0 .0 2 9,P =0 .0 2 2 ,P =0 .0 0 2 ) ;胃癌组织的T细胞及癌性上皮细胞中细胞因子IL 10 ,TGF β1和TNF α的表达较非癌性黏膜组织增高。结论　胃癌局部Th1、Th2 之间的平衡向Th2 漂移 ,提示胃癌局部呈免疫抑制状态。CD+ 8T细胞中细胞因子表达变化更为显著 ,提示CD+ 8T细胞在胃癌局部免疫抑制发生中起主要作用。对不同细胞亚群细胞因子表达状况的了解有助于免疫治疗方案的设计。

摘要：目的:构建TRF2小干扰RNA载体,观察其在胃癌细胞中的表达．方法:根据pSilencer3．1-H1载体要求设计两对小干扰RNA,退火后连接入载体相应位点．经双酶切及测序鉴定后分别转染多药耐药衍生胃癌细胞SGC7901／ADR和SGC7901/VCR． G418选择培养液培养2 mo选取转染组及对照组细胞克隆．MTT法检测转染对细胞生长增殖速度的影响．细胞用阿霉素和足叶乙甙处理 6h后Western blot法检测TRF2表达．结果:成功构建TRF2小干扰RNA载体,建立稳定转染细胞株,转染后TRF2表达明显降低,对细胞的生长增殖速度无明显影响(P>0．05)．结论:成功构建TRF2小干扰RNA载体及稳定转染细胞株．

摘要：目的 :检测RhoC在胃癌细胞系中的表达 ,并构建其小干扰RNA(siRNA)表达载体。方法 :以Westernblot方法检测RhoC在多株胃癌细胞系中的表达。利用计算机辅助设计RhoC特异性siRNA ,体外合成siRNA基因并将其定向克隆入真核表达载体mU6pro。以脂质体法转染RhoC siRNA载体至高转移的人胃癌细胞系AGS中 ,以Westernblot方法鉴定RhoC siRNA对RhoC表达的作用。结果 :RhoC蛋白在具有高转移潜能的胃癌细胞系中表达增强。利用BbsⅠ和XbaⅠ双酶切法鉴定重组载体后 ,DNA测序证实合成的siRNA基因序列正确并已被准确克隆入mU6pro载体。RhoC siRNA载体可特异性抑制AGS细胞中RhoC的表达。结论 :RhoC特异性siRNA表达载体成功构建 。

摘要：目的　　研制可表达胃癌ＭＧ７－Ａｇ模拟表位的减毒鼠伤寒杆菌疫苗。　方法将ＮｃｏⅠ位点和ＭＧ７－Ａｇ模拟表位编码序列的互补序列设计到上游引物的５′端。以含有ＨＢｃＡｇ全序列的质粒ｐ１．２Ⅱ为模板，通过ＰＣＲ扩增，获得ＭＧ７－Ａｇ模拟表位与ＨＢｃＡｇ的融合基因。将目的基因插入载体ｐＵＣｍ－Ｔ，经酶切鉴定和序列测定证实后，再亚克隆至与减毒鼠伤寒杆菌Ｘ４５５０互补的质粒ｐＹＡ３３４１中，再以此重组质粒转化减毒鼠伤寒杆菌Ｘ４５５０。结果序列测定证实，ＰＣＲ产物为胃癌ＭＧ７－Ａｇ模拟表位与ＨＢｃＡｇ的融合基因片段；最终得到含有目的基因片段的重组表达载体ｐＹＡ３３４１。重组质粒在Ｘ４５５０中的表达产物，经Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ表明，在相对分子质量（Ｍｒ）约在２２　０００处有１条可与抗ＭＧ７　ｍＡｂ特异性结合的多肽表位。结论成功地研制可表达胃癌ＭＧ７－Ａｇ模拟表位减毒鼠伤寒杆菌疫苗，为进一步研究其在胃癌免疫治疗中的作用奠定了基础。

摘要：目的　扩增人核糖体蛋白 L 2 3(RPL 2 3)编码基因序列 ,构建其正、反义真核表达载体 ,分别转染胃癌细胞SGC790 1及胃癌长春新碱耐药细胞 SGC790 1 /VCR,以进一步研究 RPL2 3基因与胃癌多药耐药的关系 .方法　按文献报道的 RPL 2 3核苷酸序列设计合成 PCR引物 ,利用总 RNA抽取试剂盒从人胃癌长春新碱耐药细胞 SGC790 1 /VCR中提取细胞总 RNA,反转录合成 c DNA,再用 PCR方法扩增目的基因序列 .PCR产物经 DNA序列测定证实后 ,通过双酶切 ,将所获目的基因分别按正、反两个方向定向克隆入真核表达载体 pc DNA3.1 (+)中 ,酶切电泳鉴定 .采用脂质体介导的方法将 pc DNA3.1 (+) - RPL 2 3转染 SGC790 1细胞 ,pc DNA3.1(+) - an RPL2 3转染 SGC790 1 /VCR细胞 ,经 G41 8筛选后 ,随机挑选细胞克隆 .通过斑点杂交检测正、反义转染后 RPL2 3m RNA表达水平的变化 .结果　应用 RT- PCR反应扩增获得大小约 0 .5 kb的特异性片段 .经 DNA序列分析 ,证实与文献报道的人 RPL2 3编码区序列一致 .重组正义真核表达载体 pc DNA3.1 (+) - RPL2 3双酶切产生大小约 5.4kb,0 .5kb的片段 ;重组反义真核表达载体 pc DNA3.1 (+) - an RPL2 3双酶切产生大小约 5.4kb,0 .5kb的片段 ,均与预期结果相符 .转染细胞经筛选后 ,随机挑选 。

摘要：目的　研究西安地区人乳头瘤病毒 (HPV)的感染与胃癌的关系 .方法　运用 PCR方法 ,同时设计 HPV共同引物和 HPV16型和 HPV18型巢式引物 ,对胃癌组织 (n=40 )、癌旁组织和非肿瘤组织 (n=10 )进行 HPV DNA的检测 .结果　胃癌 40例组织中 HPV 检出 15例 ,总检出率为37.5 % ;癌旁组织和非肿瘤组织未检出 .HPV的检出以HPV16型为主 ,占检出阳性的 80 .0 % ,且与癌组织的分化程度密切相关 .结论　 HPV的感染 ,主要为高危型

摘要：目的 :研究甲磺酸加替沙星胶囊在健康人体内的药代动力学及相对生物等效性 .方法 :采用双周期随机交叉、自身对照试验设计法 ,将 1 8例男性健康志愿者随机分为两组 ,分别单剂量口服甲磺酸加替沙星胶囊 4 0 0mg(试验品 )和甲磺酸加替沙星片 4 0 0mg(参照品 ) ,经 1w清洗期后交叉换药 ,以高效液相色谱法测定受试者服药后血浆中加替沙星的经时浓度 ,计算加替沙星药动学参数 ,以双单侧t检验统计法比较两种甲磺酸加替沙星制剂是否具有生物等效性 .结果 :甲磺酸加替沙星在人体内的处置为一级吸收单室模型 ,试验品和参照品的主要药动学参数Tmax(实测值 )、Cmax(实测值 )、AUC(0 -2 4h) 分别为 :为 (1 .5 1± 0 .39)和 (1 .5 4± 0 .4 0 )h ,(3.4 8± 0 .84 )和 (3.4 3± 0 .96 )mg·L-1 ,(34.5 1± 8.4 9)和(33.0 4± 1 0 .2 5 )mg·h·L-1 ;试验品的相对生物利用度为1 0 7.4 % .结论 :甲磺酸加替沙星具有口服后吸收快、血药浓度较高、体内平均滞留时间 (MRT)较长的特点 ;两种甲磺酸加替沙星制剂在人体内具有生物等效性 (P >0 .0 5 ) .