摘要：为了建立水貂绿脓杆菌的PCR快速检测方法,试验利用绿脓杆菌PEA基因序列保守区设计了1对引物,扩增了该基因大约400 bp区域的片段,并进行了特异性和敏感性检测。结果表明:该方法能够特异性地检测水貂绿脓杆菌,模板DNA量为10 pg时,目的条带仍清晰可辨。说明该技术具有简便、特异、快速和敏感度强的特点,可用于水貂绿脓杆菌菌株的鉴别诊断。

摘要：根据NCBI公布的其他物种DQB1基因序列,设计了1对特异性引物,采用PCR-SSCP方法对5个水貂品种血液DQB1基因第2外显子365 bp扩增片段进行分析,并构建了系统发育树。结果显示:5个品种中共检测到6种基因型,4个等位基因;多态信息含量(PIC)为0.4997～0.641 8,平均为0.561 4,美国短毛黑最高(0.641 8),咖啡色水貂最低(0.499 7)。期望杂合度(He)在0.480 1～0.760 0之间,平均为0.582 5。聚类分析在一定程度上反映了5个水貂品种间的亲缘关系,为下一步开展抗病育种提供了数据基础。

摘要：根据禽网状内皮组织增生症病毒(REV)DBYR1102株的前病毒基因组c DNA序列设计并合成1对引物,以p T-G质粒为模板,通过PCR扩增获得该病毒CA基因片段。将其克隆于pET-30a(+)中,构建原核表达质粒pET30a-CA。重组质粒经双酶切和测序鉴定,转化BL21(DE3),经IPTG诱导,SDS-PAGE鉴定蛋白表达情况。利用Ni-NTA His Bind Resin纯化重组蛋白,并经蔗糖浓缩,Western blot法检测重组蛋白的反应原性。纯化后的目的蛋白免疫新西兰白兔,制备兔抗CA多克隆抗体并对其进行鉴定。结果表明构建的重组质粒pET-30a-CA在大肠杆菌BL21中呈可溶性高效表达。经Ni柱纯化和蔗糖浓缩后得到纯度较高的融合蛋白,以纯化的融合蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,抗体效价达1∶25 600。该研究为REV的检测及CA基因的深入研究奠定了基础。

摘要：参考NCBI GenBank中上传的雪貂、海獭DQA基因序列设计出RT-PCR扩增引物,克隆了美洲水貂DQA基因全长cDNA序列;利用生物信息学软件构建了DQA基因系统进化树,预测了DQA蛋白结构与功能。结果表明:DQA基因全长cDNA序列大小为1 147 bp, ORF序列为768 bp,编码255个氨基酸,存在23个氨基酸的信号肽序列;DQA蛋白第236位氨基酸疏水性最强,53位氨基酸亲水性最强,218-240氨基酸可能为跨膜区域;蛋白质二级结构存在3个α-螺旋区和14个β-折叠区,处于无规则卷曲状态。获得了一个DQA蛋白三级结构模型,覆盖范围为25-208氨基酸;系统进化树表明,美洲水貂与欧洲雪貂亲缘关系最近,与家马关系最远。该研究结果为进一步阐明水貂DQA基因和蛋白的结构与功能提供了一定数据基础。

摘要：为了利用环介导等温扩增(LAMP)技术建立水貂绿脓杆菌核酸快速检测方法。根据绿脓杆菌外毒素A基因240bp片段保守序列设计一套LAMP特异性引物,对水貂绿脓杆菌基因组DNA进行LAMP扩增,通过浑浊度、SYBRGreen荧光染料显色及电泳观察结果,并进行特异性和敏感性检验。结果表明:完成反应仅需要60min(65℃),特异性强,最低检测限为1ng/μL。该方法简单快捷、特异性强、灵敏度高,适合于基层使用,具有广泛的临床应用前景。

摘要：本试验拟克隆白来航鸡干扰素刺激基因12(ISG12),并对其进行生物信息学预测分析。根据ncbi发表的原鸡ISG12基因序列(登录号:BN000223.1),设计ISG12基因特异性扩增引物。提取白来航鸡的肝脏、脾脏RNA,并反转录为cDNA,利用RT-PCR技术扩增白来航鸡ISG12基因序列,并利用生物软件对其编码蛋白进行生物信息学分析预测。结果显示,白来航鸡ISG12基因CDS区为324bp,编码107个氨基酸。ISG12编码蛋白理论分子量为10.28 kD,理论等电点(PI)为10.18,不稳定系数为59.46,脂肪系数为41.12。存在3个明显的亲水区,整条多肽链表现为亲水性;无信号肽,不存在跨膜区;存在21个潜在的磷酸化位点,6个潜在的O-糖基化位点,不含N-糖基化修饰位点;含有3个抗原决定簇区域。本试验成功克隆了白来航鸡ISG12基因,为深入了解ISG12编码蛋白的功能及进一步阐述其抗病毒的机理提供了科学依据。

摘要：本试验拟克隆梅花鹿半乳糖凝集素-1(Galectin-1)基因,并对其编码产物进行生物信息学预测分析。根据ncbi数据库中已发表的梅花鹿Galectin-1 mRNA序列,设计合成梅花鹿Galectin-1基因扩增引物。提取梅花鹿肝脏组织RNA,反转录为cDNA为模板,利用RT-PCR技术扩增梅花Galectin-1基因序列,并对其核苷酸和推导氨基酸序列进行遗传演化分析,结果显示,梅花鹿Galectin 1基因编码区为408 bp,编码135个氨基酸。Galectin-1编码蛋白理论分子量为14.69 kD,理论等电点为5.1,不稳定系数为14.87,推测该蛋白为稳定蛋白。脂肪系数为81.04,总平均亲水指数为-0.145。Galectin-1编码蛋白不含信号肽,无跨膜区;存在1个潜在的磷酸化位点不含O-和N-糖基化修饰位点;含有7个抗原决定簇区域,抗原倾向指数高。本试验成功克隆了梅花鹿Galectin-1基因,并对其进行了生物信息学分析预测,为深入研究Galectin-1编码蛋白的功能提供依据,进一步阐明了其生物功能。