摘要：通过设计基因保守区的特异性简并引物,运用SMARTRACERT-PCR技术,首次从粉棒束孢中克隆出完整的几丁质酶基因。该基因cDNA全长1549bp,5'端非翻译区89bp,3'端非翻译区有188bp,开放阅读框(ORF)1272bp,编码423个氨基酸。信号肽长度为22个氨基酸。信号肽很可能需要两次剪切。成熟的蛋白理论分子量为43.9kDa,理论等电点为5.67。氨基酸序列具有几丁质酶18族的两个高度保守的活性区域,一个是酶作用活性位点,另一个是几丁质结合区域。该蛋白可归于几丁质酶18族V类。成熟蛋白的氨基酸序列与裂虫壳AAV98691、白色扁丝霉CAA45468、菌生轮枝孢AAP45631、莱氏野村菌AAP04616和球孢白僵菌AAN41261的同源性分别为91%,89%,80%,76%和75%。

摘要：粉拟青霉是一种常见的昆虫病原真菌,被广泛用于生物防治。根据GenBank中已登录的淡紫拟青霉,球孢白僵菌和金龟子绿僵菌的类枯草杆菌蛋白酶基因序列的同源性比较,以它们高度保守的核苷酸序列设计一对引物,采用RT-PCR和3’/5’-RACE相结合的方法,首次从粉拟青霉中克隆出完整的类枯草杆菌蛋白酶cDNA基因。其全序列为2060bp,该序列5’-端和3’-端的非编码序列长度分别为209bp和252bp,开放阅读框为1599bp,编码532个氨基酸,信号肽长度为16个氨基酸。成熟蛋白的氨基酸序列和金龟子绿僵菌小孢变种(CAB63913),玉米赤霉菌(EAA68914),金龟子绿僵菌蚱蜢变种(CAC95047)及柄孢壳(AAC03564)的同源性分别为69%、71%、68%和68%。成熟蛋白具有典型的丝氨酸蛋白酶活性位点,同时有5个半胱氨酸,3个潜在的N-糖基化位点和2个可能的O-糖基化位点。该基因在的密码子第三位碱基的使用上,显示出明显的对C的偏爱。

摘要：以提高菌丝生物量为目的,对中国被毛孢RCEF0273菌株的固体和液体培养工艺进行研究。结果表明,固体培养的最佳氮源为奶粉,其后依次为黄豆粉、酵母粉和麸皮,最差的为蛋白胨和NH4NO3;碳源对此菌的生长影响较小,比较适合的碳源为葡萄糖、蔗糖和果糖,其次为乳糖、淀粉等。应用正交设计方法研究接种量、CMC浓度以及添加玻璃珠的数量对菌丝生物量的影响,结果显示,30%的接种量可显著提高菌丝的生物量,而添加CMC或玻璃珠不利于菌丝生长。

摘要：研究细脚拟青霉RCEF0788菌株抑制单胺氧化酶(MAO)活性产物的培养工艺。结果表明,综合MAO抑制率和发酵液提取物得率情况,较合适的氮源为酵母粉和蛋白胨;较合适的碳源为麦芽糖和乳糖;适宜的pH值为6.5。正交设计结果验证该菌株抑制MAO活性的最佳培养工艺为20 g.L-1酵母粉,20 g.L-1乳糖,10 g.L-1蛋白胨,10 g.L-1麦芽糖,1 g.L-1磷酸二氢钾和1 g.L-1硫酸镁,26.5℃,培养9 d。

摘要：按照正交设计方案在固体培养基中加入3种不同浓度的植物激素,对粉被虫草子实体的形成进行了初步研究。结果表明,不同激素组合的处理均获得了大量的子实体,但是因素和水平的显著性随着指标选择的不同而有所差异。5-羟基吲哚乙酸(IAA)对于子实体的及早生成、环磷腺苷(cAMP)对鲜重、以及植物激动素(KT)对干重均有显著影响,而3种激素对子实体的数量(生长点数)均无显著影响。

摘要：通过比较不同提取方法及设计正交试验确定了蝉拟青霉中虫草素的最佳提取工艺:采取管式离心机离心发酵醪,收集菌丝体50℃热空气烘干,按菌粉:石油醚=1:1的量用石油醚脱脂,用布氏漏斗抽滤收集菌丝体烘干,最后用75%乙醇、45℃超声波浸提虫草素,提取4次,每次提取40min,料液比为1:20。

摘要：异三元G蛋白是真核细胞感知外界信号后将信号传递到胞内的重要分子,在生物中参与了广泛的信号转导途径,如光、神经递质和激素等。为了研究G蛋白在家蚕Bombyxmori中的生理功能及其作用机理,我们运用生物信息学方法在已有的家蚕基因组数据库中找到了一段与G蛋白alpha亚基(Gα)同源性很高的序列。通过设计特异性引物,运用PCR和RACE技术,成功地克隆了一个家蚕Gα基因的全长cDNA序列。该基因全长1509bp(GenBank登录号:EU914850),开放阅读框(ORF)为1158bp,编码385个氨基酸。Blast和DNAstar等软件分析发现该基因编编码的蛋白质与其他物种已知的Gα具有一定的保守性,将它命名为BmGα73B。RT-PCR扩增检测该基因在家蚕不同组织器官和不同发育时期的转录表达活性,结果表明它在不同发育时期的家蚕各组织器官中都有表达。从组织水平上看,BmGα73B在中肠中表达量最高,在马氏管、头部和神经索等组织中也有适量表达。在家蚕的不同发育时期中,转录水平峰值出现在幼虫期,在蛹早期也有适量的表达,而在预蛹期、蛹后期和成虫期几乎没有表达。结果说明BmGα73B可能参与了家蚕生长前期的中肠发育过程,为进一步研究G蛋白在家蚕发育过程的作用奠定了一定的基础。

摘要：异三元G蛋白是真核细胞感知外界信号后将信号传递到胞内的重要分子,参与生物体广泛的信号转导。为了研究家蚕体内G蛋白的生理功能及其作用机制,运用生物信息学方法预测了家蚕G蛋白γ1亚基(Gγ1)的序列,设计引物验证预测序列后,克隆了家蚕Gγ1的序列,再通过酶切克隆至表达载体pET-41b(+)后,导入***21宿主菌中,经异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组谷胱甘肽硫转移酶(glutathione s-transferase,GST)融合蛋白,并亲和层析纯化表达产物。家蚕Gγ1重组GST融合蛋白经SDS-PAGE电泳和Western blot分析,在分子质量约36 kD处出现特异性蛋白条带,重组蛋白经GST亲和层析柱纯化后,得到了高纯度的融合蛋白,说明已经成功克隆到家蚕Gγ1基因,并在***21中高效表达。

摘要：“思壮”虫草菌丝体胶囊的小鼠急性经口毒性试验结果表明:雌雄小鼠LD50值均大于10000mg/kg,根据食品急性分级标准,属实际无毒级。Ames试验采用平板掺入法,剂量达5000μg/皿,加或者不加S9,对标准测试菌TA97a、TA98、TA100和TA102均未检出明显的诱变活性。其对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核和小鼠睾丸初级精母细胞染色体畸变试验结果显示:剂量达5000mg/kgb.w.,均未检出对雌雄小鼠嗜多染红细胞及雄性小鼠睾丸初级精母细胞染色体的诱变活性。30d喂养试验结果表明:剂量达到最大试验设计剂量时,即4000mg/kgb.w.,该种胶囊对动物各项受试指标,仍然未见明显有害作用。

摘要：异三元G蛋白是真核细胞感知外界信号后将信号传递到胞内的重要分子,参与生物体广泛的信号转导。为了研究G蛋白在家蚕中的生理功能及其作用机理,运用生物信息学方法预测到家蚕Gγ的一段序列,通过设计特异性引物、PCR和RACE技术,克隆得到家蚕Gγ30A的序列。随后将该蛋白成熟肽cDNA片段通过酶切克隆至表达载体pET-41b(+),并导入*** BI21宿主菌中进行诱导表达。家蚕Gγ30A重组GST融合蛋白经SDS-PAGE和Western blot分析,在相对分子量约38 KDa处,出现特异性蛋白条带,表达方式分析发现融合蛋白在上清和包涵体中均有表达;试验结果说明我们已成功克隆到家蚕Gγ30A基因(GeneBank登录号:HQ699664),并在*** BL21中高效表达。