摘要：为检测荞麦类食品及原料中的荞麦源性成分,根据荞麦品种DW-1核酸序列信息(KY945277.1)设计了荞麦品种特异性引物;以苦荞和甜荞品种基因组为模板,建立了荞麦源性成分的实时荧光PCR(qPCR)的检测方法,并对购自市场的多个粮食产品进行检测,检测结果与商品标识相符方法特异性强、灵敏度高,为食品中荞麦源性成分的检测提供了新思路。

摘要：目的基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立一种常见的有毒蘑菇(疣孢褐盘菌Peziza badia)的快速检测方法。方法使用疣孢褐盘菌的内部转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)作为目的基因设计特异性的LAMP引物,使用可视化法和实时荧光法分别对LAMP扩增结果进行判断,可视化法通过颜色即可判断结果,实时荧光法观察是否有扩增曲线,两种技术相互验证。结果本研究设计的引物特异性强,与其他阴性样品无交叉反应,可视化法和实时荧光法的检测结果一致。本方法的检出限为0.8 ng/μL;将阴性和阳性样品按比例混合,并经过水煮和人工胃液消化后提取DNA,依然能检测到含量为1%的阳性样品。结论本方法对仪器要求低,检测速度快,操作和判断结果简单,有利于方法的传播,可用于疣孢褐盘菌的快速检测。

摘要：GE-J12是中国农业科学院研发的转G2-EPSPS基因和GAT基因的抗除草剂大豆新品系。根据抗除草剂大豆GE-J12品系外源基因插入位点5’端转化体特异性序列设计引物和探针,经引物探针筛选、特异性测试、反应体系和程序优化、标准曲线构建、检测极限和定量极限测试等试验,建立了基于TaqMan水解探针的实时荧光定量PCR检测方法。该方法特异性强、准确度高,在RSD小于25%的情况下检测极限为0.032%,定量极限为0.16%,线性度大于0.992,经5%、3%和1%定值样品测试,与真实值平均偏差为2.87%-16.67%。可用于转基因耐除草剂大豆GE-J12转化体特异性序列含量的精准定量,为GE-J12大豆新品系的检测提供了新方法。

摘要：建立对沙门氏菌的G-四联体与聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)联用可视化检测方法。以沙门氏菌属特异性基因invH为检测目标,设计5’端含有G-四联体互补序列的上下游引物,通过PCR的特异性识别并扩增目标序列,获得大量含G-四联体的双链DNA,变性后与氯高铁血红素结合生成具有过氧化物酶活性的模拟酶(DNAzyme),并催化H_(2)O_(2)与2,2’-联氮-双(3-乙基-苯并噻唑琳-6-磺酸)二胺盐由无色变为绿色,实现G-四联体与PCR联用对沙门氏菌的可视化检测。在优化的检测体系下,沙门氏菌基因组的质量浓度对数与421 nm处的吸光度具有良好的线性关系,其回归方程为y=0.1299x+0.2179,R^(2)=0.9945,线性范围0.07~771.6 ng/μL,灵敏度为0.07 ng/μL。特异性分析表明:此方法适用于沙门氏菌属的检测,可成功应用于人工污染沙门氏菌牛奶的检测,检出限为1.2×10^(2) CFU/mL。通过检测30种市售样品,发现其结果与国标检测方法结果一致。本研究为食源性致病菌的检测提供了新的策略。

摘要：采用蜂胶作为非发酵性豆制品中的保鲜剂进行试验,以菌落总数、酸度和挥发性盐基氮为指标,设计正交试验对保鲜效果进行评定,结果表明:加入蜂胶0.4‰喷涂,0.02×105Pa真空包装,4℃贮存,保质期可达35d。

摘要：为快速检测水稻中是否含有crylAb/c抗虫基因,利用LAMP在线引物设计软件针对目的基因的6个区域设计筛选4条特异性引物,利用Bst DNA聚合酶在65℃条件下恒温扩增1 h,通过肉眼观察浑浊度、凝胶电泳法和荧光染料法三种方法来显示检测结果,并对LAMP反应体系中各影响因素进行优化,并确定LAMP最佳反应体系。通过对LAMP方法与PCR方法检出限的比较,证明其检出限比PCR方法低1/10。同时用2种转基因作物和4种非转基因作物检测LAMP方法的特异性,结果显示其特异性与PCR检测一致。说明LAMP方法检出限低、特异性好,适用于转基因水稻中crylAb/c基因的检测。

摘要：为了将筛选得到的吸水链霉菌107.3的谷氨酰胺转氨酶基因在毕赤酵母GS115中表达,并通过优化发酵条件来提高重组菌株酶的表达量,本试验构建了由吸水链霉菌前肽pro、kex2酶切位点、成熟酶mTGase 3部分组成的融合基因,电转至毕赤酵母GS115中进行表达;采用Plackett-Burman(PB)设计和响应面法(RSM)在摇瓶水平研究了重组毕赤酵母的发酵条件(接种量、诱导温度和时间、初始pH值和甲醇浓度)。结果表明:吸水链霉菌的TGase基因在毕赤酵母GS115中得获得成功表达,酶活力为0.3 U/mL;通过PB试验设计确定了影响产酶的显著性因素为诱导初始pH、甲醇浓度和接种量。进一步选择该3个显著因素进行RSM中心组合试验,确定了最优的产酶条件为:接种量OD600为6、pH 7、甲醇浓度2.0%、诱导温度23℃、诱导时间72 h。优化发酵条件后,重组菌株产TGase酶活力可达1.1 U/mL,是初始酶活的3.6倍。本研究构建的MTG异源表达体系为MTG生产和分子改造提供了平台。

摘要：为快速检测蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌和沙门氏菌4种食源性致病菌,建立4重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的检测方法。针对菌株的特异性基因设计引物,选择退火温度相近,扩增条带区间不同的引物为多重聚合酶链式反应引物组,并对多重PCR的引物浓度、退火温度进行优化,确定扩增条件。结果表明,在54℃的退火温度下,4种菌可扩增长度为246、166、65、107 bp的清晰片段,其检测灵敏度为蜡样芽孢杆菌2×10^1 CFU/mL,金黄色葡萄球菌可达1.3×10^2 CFU/mL,志贺氏菌可达1.3×10^2 CFU/mL,沙门氏菌可达1.4×10^2 CFU/mL。

摘要：建立一种高灵敏的快速检测黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)的方法。基于氧化石墨烯(graphene oxide,GO)通过π-π共轭吸附单链寡核苷酸(single-strand DNA,ssDNA),对已结合靶标的ssDNA吸附能力较弱的特性,设计针对AFB1核酸适配体的筛选方案。经过10轮筛选,共获得45条ssDNA序列。挑选具有代表性的6条序列进行亲和力分析实验,其解离常数Kd分别为16.29、27.88、18.54、23.11、47.94、22.31 nmol/L。选用亲和力较高的AFB-5、AFB-8进行特异性实验,结果显示所筛选的适配体能特异性吸附AFB1。最后利用适配体AFB-8作为识别元件建立了基于纳米金比色检测AFB1的方法。在优化的检测条件下,AFB1质量浓度与A520 nm值有良好的线性关系,其回归方程为y=-0.00709x+0.46142(R^2=0.9979),线性范围为0.025~10 ng/mL,检出限为0.025 ng/mL。通过特异性实验和对大米样品加标回收实验,加标回收率为83.36%~105.74%,证明本方法的可行性。

摘要：为实现转基因耐除草剂大豆品种‘ZH 10-6’转化体成分的精准定量检测,以转基因大豆‘ZH 10-6’的5′端边界序列为靶序列,设计PCR扩增引物和TaqMan探针,并对引物探针浓度进行优化,经特异性测试,建立了耐除草剂大豆品种‘ZH 10-6’的微滴式数字PCR检测方法。结果表明:1)特异性良好:只有以转基因耐除草剂大豆品种‘ZH 10-6’基因组为模板才有扩增信号;2)灵敏度高:在相对标准偏差≤25%的情况下,方法的检出限(LOD)为13.0个拷贝;定量限(LOQ)为66.0个拷贝;3)PCR扩增反应模板含量与样品拷贝数之间线性相关系数R^(2)>0.99,DNA含量线性范围为0.08%~100.00%。综上,本研究建立的转基因耐除草剂大豆‘ZH 10-6’转化体定量方法特异性强、稳定性好、准确度和灵敏度高,可用于对转基因大豆品种‘ZH 10-6’的定量检测。