摘要：参考GenBank禽呼肠孤病毒 (AvianReovirus,ARV)和番鸭呼肠孤病毒 (MuscovyDuckReovirus,MDRV)非结构基因 (NS)序列设计合成一对引物 ,对番鸭呼肠孤病毒S14和C4株NS基因进行RT_PCR扩增 ,克隆到pMD18_T载体中 ,并对克隆产物进行酶切鉴定和测序 ;番鸭呼肠孤病毒NS基因由 12 91bp核苷酸组成 ,与禽呼肠孤病毒NS基因相比 ,在非编码区第 115 5位少一个碱基 ,本文第一次证实 12 91bp是番鸭呼肠孤病毒NS基因特有的长度 ;番鸭呼肠孤病毒S14和C4株NS基因的 5’末端和 3’末端分别为 5‘GCTTTTT和TCATC_3’ ,是禽类呼肠孤病毒基因末端特有的碱基序列 ,S14和C4株NS基因的的有效阅读框 (2 4～ 112 7bp)编码 36 7个氨基酸组成的蛋白 ,分子量约为 4 0kDa ;番鸭呼肠孤病毒S14和C4株NS蛋白等电点分别是 7.3和 7.0 ,GC含量分别为 5 4 .2 6 %和 5 3.71% ,番鸭呼肠孤病毒S14和C4株NS基因间核苷酸同源性为 99.3% ,仅有 4个氨基酸差异 ,S14和C4与法国番鸭呼肠孤病毒 890 2 6株NS基因核苷酸同源性分别为 87.8%和 87.9% ,与鸡关节炎病毒S1133NS基因同源性分别为 79.0 %和 79.3% ;进化树分析表明本研究中的两株番鸭呼肠孤病毒非结构基因 (NS)与番鸭呼肠孤病毒的亲缘关系比禽呼肠孤病毒近的多 ,建议番鸭呼肠孤病毒应归属为正呼肠孤?

摘要：参考GenBank中番鸭呼肠孤病毒(muscovy duck reovirus,MDRV)S1基因序列设计并合成3条引物C1、HP11和HP12,组成半套式RT-PCR,扩增片段为300 bp.应用该半套式RT-PCR对MDRV、禽呼肠孤病毒(ARV)、番鸭细小病毒(MPV)、鹅细小病毒(GPV)、鸡胚成纤维细胞(CEF)和番鸭胚成纤维细胞(MDEF)培养物进行扩增.结果仅能从MDRV中扩增出300 bp特异片段,而不能从ARV、MPV、GPV、CEF和MDEF细胞培养物中扩增出特异片段;该方法检测灵敏度为1 fg核酸,重复性好.对人工感染和临床疑似病例用病毒分离和半套式RT-PCR进行检测,2种方法符合率为100%.因此,该半套式RT-PCR可以用于番鸭呼肠孤病毒病的临床快速检测.

摘要：根据已发表的番鸭呼肠孤病毒(DRV)δC蛋白基因的核苷酸序列设计引物,应用RT-PCR技术,扩增番鸭呼肠孤病毒δC蛋白基因,经T/A克隆,插入到pMD18-T载体上,测序分析结果表明MW9710株δC蛋白基因的开放阅读框为810nt,编码由269个氨基酸组成,分子量为29.4Ku的δC蛋白。应用BLAST等分子生物学软件分析,其与法国DRV89330株的δC蛋白基因的同源率达93%,所推导的氨基酸的同源率达93%,与ARV的核苷酸无同源性,推倒的氨基酸的最大同源率为26%。经Antheprot5.0蛋白质软件分析表明:MW9710株δC蛋白具有较大的疏水性和抗原性,无跨膜区,为进一步研究该基因的表达和研制基因工程疫苗及诊断试剂奠定基础。

摘要：参考GenBank番鸭呼肠孤病毒(muscovy duck reovirus,DRV)σB和σNS基因序列设计合成引物,对番鸭呼肠孤病毒MW9710株σB和σNS基因进行RT-PCR扩增,并对PCR产物进行了克隆和测序。结果显示扩增产物分别为1154bp和1113 bp,与预期的目的片段大小一致。核苷酸序列经BLAST软件分析表明：番鸭呼肠孤病毒MW9710株σB基因与番鸭呼肠孤病毒法国89026株同源性为88．1%；氨基酸同源性为94．0%：σNS基因与法国89026株和89330株同源性分别为93．8%和93．1%；氨基酸同源性为95．9%和95．1%。而σB和σNS基因与禽呼肠孤病毒的同源性约为60%～80%。表明番鸭呼肠孤病毒是不同于禽呼肠孤病毒的独立基因群。

摘要：目的建立重组酶聚合酶扩增侧流层析技术(RPA-LFD)检测新冠病毒(SARS-CoV-2)核酸快速诊断方法,为基层医院和边远地区防控新冠病毒疫情提供技术支持。方法根据新冠病毒N基因核苷酸序列中保守序列,通过生物信息学软件分析、设计和筛选最佳的重组酶聚合酶扩增引物及侧流层试纸探针,优化重组酶聚合酶扩增反应条件以及检验建立方法的灵敏性和特异性。结果利用RPA-LFD法在37℃下反应15 min可检测到每个反应最低100 fg含量的新冠病毒,并与流感病毒、副流感病毒、鼻病毒和腺病毒没有交叉反应,因此据此可以建立灵敏性高、特异性强和可操作性强的新冠病毒快速诊断方法。结论通过RPA-LFD技术建立的新冠病毒快速诊断方法可获得较为理想的灵敏度、特异性,为进一步研制新冠病毒核酸快速诊断试剂盒奠定了基础。

摘要：从患运动障碍的雏鹅肝脏和脾脏分离到一株鹅源呼肠孤病毒,该病毒经琼脂扩试验可与番鸭呼肠孤病毒(MuscovyDuckReovirus,MDRV)的抗血清发生交叉反应,推测其为呼肠孤病毒,命名为GRV1。参考GenBank禽呼肠孤病毒(AvianReovirus,ARV)和番鸭呼肠孤病毒小外壳蛋白(minorcoreprotein)σC蛋白基因序列设计合成了一对引物,病毒RNA经RT-PCR扩增,产物为810bp,与预期的目的片断大小一致,测序结果表明σC基因在280～1089区间是一个开放性阅读框架,编码269个氨基酸的蛋白,GC含量为49.88%,等电点为6.497,分子量为29.4Ku。核苷酸序列经DNAStar(6.0)软件分析,与法国番鸭呼肠孤病毒89026株核苷酸同源率为93.0%,与鸡呼肠孤病毒σC基因同源率仅为21%～25%,同源性分析表明鹅呼肠孤病毒与番鸭呼肠孤病毒可能来自同一祖先,建议将鹅呼肠孤病毒连同番鸭呼肠孤病毒归属为正呼肠孤病毒属第二个亚群中不同于禽和内尔森贝海湾呼肠病毒的独立基因群。由蛋白质分析软件Anthepro5.0和MultiCoil软件分析表明,抗原区多位于N末端,没有跨膜区,σC为三股螺旋结构,这是我国第一次在鹅体内分离到呼肠孤病毒,同时也是第一次在数据库中提供σC的序列。

摘要：根据已发表嗜水气单胞菌(AH)的外膜蛋白基因(Omp)的核苷酸序列设计1对特异性引物,应用PCR 技术,扩增AHL316的主要外膜蛋白基因(Momp),经T/A克隆,插入到pGEM—T系列载体上进行序列测定,结果表明Momp基因最长的开放阅读框(ORF)为1 035 nt,编码由分子量为36 kD的主要外膜蛋白(MOMP),其与国外AH分离株AF146597的Omp基因的核苷酸的同源性达96%,氨基酸的同源性达98%。应用分子生物学软件分析表明此主要外膜蛋白前24个氨基酸是较强的疏水性区域,可形成信号肽,有跨膜区,经与其他外膜蛋白系统发育进化分析表明,该蛋白属于ompA蛋白家族。

摘要：根据已发表的猪繁殖-呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)的核苷酸序列设计特异性引物,应用PCR方法对从福清市某养猪场病猪采集的淋巴结、肺、脾等器官组织病料进行检测,发现该猪场病猪病料的检测结果PRRSV和PCV-2同时为阳性,从而证实了PRRSV和PCV-2在该病猪体内混合感染。

摘要：根据Genbank中MDRV 89026毒株S4基因序列设计引物,通过RT-PCR获得番鸭呼肠孤病毒MW9710株σC蛋白基因,将此σC蛋白基因插入原核表达载体pMAL-p2X中,得到重组表达质粒(pMAL-p2X-σC)并转化大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导后能高效表达,SDS-PAGE和Western-blot检测结果发现表达的σC蛋白分子质量约为72 kDa,并以可溶性蛋白和包涵体2种形式同时存在,且具有良好的反应原性。原核表达的可溶性σC蛋白为进一步开展抗原表位和诊断试剂盒研究奠定了基础。

摘要：参考Genbank番鸭呼肠孤病毒(muscovy duck reovirus,DRV)M3基因序列设计合成引物,对番鸭呼肠孤病毒MW9710株M3基因进行RT-PCR扩增,克隆到pMD18-T载体中,并对克隆产物进行酶切鉴定。结果番鸭呼肠孤病毒M3基因长度为1997bp,而禽呼肠孤病毒长度为1996bp。5’末端和3’末端具有保守序列,分别为5’GCTTTTT和TCATC-3’。番鸭呼肠孤病毒M3基因开放阅读框(25-1683bp)编码552个氨基酸组成的蛋白,分子量约60ku,禽呼肠孤病毒在1169位少一个碱基C,阅读框(25-1932bp)编码635个氨基酸。番鸭呼肠孤病毒MW9710株M3基因与法国89330株核苷酸同源性为87.2%,氨基酸同源性为95.3%;而与禽呼肠孤病毒的核苷酸同源性低于72.5%,氨基酸同源性低于82%。表明番鸭呼肠孤病毒是不同于禽呼肠孤病毒的独立基因群。