摘要：本研究旨在建立番茄和辣椒种子携带番茄褐色皱果病毒(Tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)快速、精准的核酸检测技术。选用ToBRFV的MP蛋白基因和CP蛋白基因保守序列作为靶标区域设计了1对特异性引物ToBRFV⁃F⁃5506/ToBRFV⁃R⁃6186,建立了ToBRFV的RT⁃PCR检测方法。用ToBRFV阳性样品对该方法的灵敏度和特异性进行了系统分析,最后以疑似ToBRFV感染的实际种子样品进行验证,并与已报道的9对ToBRFV特异性引物对实际种子样品的检测效率进行比较分析。结果表明,采用本研究建立的RT⁃PCR检测方法检测限值至2.5ng/μL,且与番茄和辣椒的其他主要病毒无交叉反应,特异性良好,对50份疑似ToBRFV感染的番茄和辣椒种子样品的阳性检出率高达40%,要优于已报道的9对ToBRFV特异性引物。本研究建立的番茄褐色皱果病毒RT⁃PCR检测方法具有较高的灵敏度和良好的特异性,适用于ToBRFV感染的番茄和辣椒种子样品检测。

摘要：为建立番茄褐色皱果病毒(tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)Taq Man荧光定量RT-PCR方法,本研究针对ToBRFV RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRP)基因序列设计了4组特异性引物和Taq Man探针,构建了标准曲线,并对该方法的特异性、灵敏度和实际样品的检测效率进行评估。结果显示,该方法特异性强,与番茄花叶病毒、番茄斑驳花叶病毒、烟草花叶病毒、黄瓜绿斑驳花叶病毒、番茄环斑病毒、番茄黑环病毒、辣椒轻斑驳病毒、烟草环斑病毒和凤果花叶病毒等9种病毒均无交叉反应。建立的标准曲线的R^(2)为0.999,扩增效率为102.096%,检测灵敏度为10 fg/μL,与EPPO PM 7/146(1)推荐的CaTa28、CSP1325方法相当,是常规RT-PCR的100倍;采用该方法成功从60份番茄和辣椒叶片、种子样品中检出10份阳性样品。建立的Taq Man荧光定量RT-PCR方法特异性强、灵敏度高,适用于实际样品中ToBRFV的快速精准检测。

摘要：本研究针对南方菜豆花叶病毒(Southern bean mosaic virus,SBMV)保守序列设计了特异性PRA引物,建立了快速灵敏的一步法逆转录重组酶聚合酶扩增检测技术(RT-RPA),采用SBMV,BPMV,SMV,Ar MV和TRSV共5种病毒评价该方法的特异性,并对其灵敏度进行评价。结果显示,建立的RT-RPA方法特异性强;灵敏度达到0.1 ng。本研究建立的RT-RPA方法检测SBMV特异性强、灵敏度高,无需特殊的仪器设备,适合实验室或者现场快速检测。