摘要：目的 评价我国国产轮状病毒口服活疫苗上市后的接种效果.方法 对北京市2011年北京地区哨点医院从2011年1月1日到2011年12月31日的5岁以下腹泻患儿,轮状病毒ELISA检测阳性的患儿为本次研究的病例,轮状病毒阴性作为对照,通过回顾患儿的轮状病毒疫苗接种资料进行分析.结果 我国轮状病毒疫苗的接种效果（VE）两剂次及一剂次接种的VE分别为-59％ （95％ CI-260％,30％）及52％（95％ CI-354％,95％）,针对我国2011年的流行毒株G3P[8]型的VE为-29％（95％CI-479％,71％）.结论 本研究数据不支持我国国产轮状病毒疫苗LLR对于轮状病毒腹泻具有良好保护作用的结论,但基于本研究流行病学设计的不足,需要更严谨的设计与研究。

摘要：目的通过优化启动子、终止子、信号肽及胞内序列末端氨基酸来增加SARS-CoV-2 S-EABR蛋白在293T细胞系中的分泌性表达。方法首先构建四种含有不同元件(启动子和终止子)组合的PCDNA3.1(-)真核载体质粒(Mb、MS、Ab、AS),插入按照人密码子优化的S-EABR-1目的序列,瞬时转染293T细胞,48 h后收取细胞培养上清液和细胞裂解液,通过Western Blot和ELISA检测上清S蛋白的表达水平。然后选择表达最好的元件组合载体,插入S-EABR-1和S-EABR-2(于S-EABR-1尾部添加4个氨基酸——HSLP)目的序列,比较上清S蛋白的表达水平。最后基于上述表达效果最好的元件组合载体及插入目的序列,构建替换SARS-CoV-2 S蛋白原始信号肽的5种载体质粒(tPA,AZ,IFNα2,HSA,GLUC),比较上清S蛋白表达水平。同时利用计算机模拟SRP54亚基与信号肽核酸序列的分子对接,将对接分值(Docking Score)作为对接评价标准,预测两者的结合情况。结果在293T细胞中,Ab组合的载体分泌表达S-EABR水平最高,产量相较于Mb增加了125%。基于Ab组合载体,S-EABR-2序列表达分泌S-EABR的水平较S-EABR-1增加了约50%,进一步替换成HSA信号肽后的S-EABR表达分泌水平较S蛋白原始信号肽增加了约83%。此外,计算机模拟结果显示HSA与SRP54亚基的对接分值最高,为1505.861。结论通过真核表达元件(启动子、终止子和信号肽)及胞内序列的优化可进一步提高经密码子优化后的S-EABR在293T细胞中的分泌性表达。信号肽与SRP54亚基亲和力的计算模拟对接分值与S-EABR分泌表达水平基本吻合的结果也为后续提高目的基因分泌性表达的信号肽筛选提供了一种设计思路和筛选策略。

摘要：轮状病毒(RVs)是引起婴幼儿及动物非细菌性胃肠炎的重要病原体.研究发现,人类组织血型抗原(HBGAs)可能是RVs的结合受体.HBGAs具有丰富的多态性,包含ABO、分泌型及Lewis抗原.研究表明,不同P型的RVs与HBGAs的结合具有型特异性,而且不同人群对各型RVs易感性存在差异.因此,研究RVs与HBGAs的相互作用对于阐明RV感染的致病机理及RV疫苗的设计具有重要意义.

摘要：目的了解急性下呼吸道感染(ALRTI)患儿肠道病毒(EV)的感染状况和临床特征。方法抽取2007年9月至2008年4月因ALRTI在湖南省人民医院儿科医学中心住院的患儿的鼻咽抽吸物单数号样本404份,应用EV5'端非编码区(5'-NCR)保守序列设计引物,采用巢式逆转录RT-PCR法检测标本中EV感染状况。结果 404份ALRTI标本中,检出EV19例(4.7%),大部分患儿年龄在3岁以下(95%),男女EV检出阳性率差异无统计学意义。EV阳性患儿临床诊断为支气管肺炎者13例(68%)、毛细支气管炎者6例(32%),90%患儿有发热症状,84%有咳嗽,63%有气喘,63%有合并症,其中主要为腹泻(6例)、粒细胞减少症(4例)和急性呼吸窘迫综合征(2例)。EV阳性患儿白细胞异常的发生率为26%,一半以上存在肝功能异常,少数有心肌受累。结论 EV是儿童ALRTI不可忽视的病原之一,应密切关注EV感染的流行病学状况和临床特点,并定期测定患儿血常规、肝功能和心肌酶,努力改善其预后。

摘要：自行设计一种适合野外现场采样的病毒采集浓缩仪,采用一种新型阳离子膜NanoCeram,进行环境水体中GⅡ型诺如病毒浓缩研究。通过预实验,考察了预处理膜、不同的二次浓缩方法、不同洗脱液对病毒回收率的影响,随后优化整个浓缩过程并确定最佳的病毒浓缩方法。结果显示,预处理膜对病毒回收影响较大,PEG-NaCl沉淀、硅藻土吸附这两种二次浓缩方法的效果相当,选择0.15mol/L Na2HPO4作为硅藻土洗脱液。确定了NanoCeram阳离子膜的病毒回收率为3.02%。最后对北京市丰台区洋桥生活污水进行现场采样,成功检测到GⅡ型诺如病毒,证明该方法有效可行,适合于环境水体中诺如病毒的浓缩分离和检测。

摘要：目的 分析河北卢龙县腹泻儿童粪便标本中存在的诺如病毒株NHBGR59的全基因组序列，了解其基因结构特点和进化特征。方法根据454高通量测序获得的两个重叠群（contig）和诺如病毒参考株序列（GenBank登录号KM198534）设计NHBGR59特异性引物，用重叠反转录聚合酶链反应（ReversetranscriptionPCR，RT—PCR）和cDNA末端快速扩增的技术（rapid—amplificationofcDNAends，RACE）的方法扩增其全长基因，经过分子克隆、测序获得全基因组序列，然后进行三个开放阅读框（OpenReadingFrames，ORFs）序列和系统进化树的分析。结果诺如病毒河北卢龙珠HBGR59病毒全基因组全长为7563bp（除了PolyA尾），病毒基因组分为三个ORFs：ORF1（5～5098nt）、ORF2（5079—6731nt）和ORF3（6731～7510nt），其中ORFl和ORF2之间有20bp重叠，ORF2和ORF3之间有lbp重叠。经过全基因组序列分析发现其和基因组II基因型6（genogroupIIGenotypeVI，GII．6）诺如病毒株30443同源性最高（同源性为98．O％）。ORF2以及ORF3核苷酸和氨基酸序列与株30443同源性最高（分别为97．0％，98．0％；99．0％，98．0％）。ORFI的基因和氨基酸序列与台湾暴发的急性胃肠炎GII．6株11-FJ-5（GenBank号KM461694）同源性最高（99．0％，99．3％），只在高突变P2区发生一个氨基酸突变位点：aa308D—N；其中衣壳区的氨基酸序列与其他GII-6型诺如病毒相似度为73．0％～99．3％。进化树分析发现河北卢龙株HBGR59与GII．6型株30443和11-FJ-5亲缘关系最近。结论河北卢龙株HBGR59为诺如病毒GII．6型，进化关系上与已报道的GII.6型株30443和11-FJ-5最近。

摘要：目的分析2017至2020年我国诺如病毒流行株GⅡ.4 Sydney[P31]基因型的基因组以及变异情况。方法利用通用引物初步建立GⅡ组诺如病毒基因组扩增方法,扩增GⅡ.4 Sydney[P31]株基因组,并应用高通量测序技术对其基因组测序,对GⅡ.4 Sydney[P31]株进行系统进化分析和关键位点分析。结果利用初步建立的GⅡ组基因组扩增方法,8株GⅡ.4 Sydney[P31]株中,6株扩增成功并获得基因组序列。通过系统进化分析表明,本研究获得的自2017—2020年6株毒株和2015—2019年的GⅡ.4 Sydney[P31]参考株划为一簇,2013年我国毒株GZ20133135株与2012—2014年GⅡ.4 Sydney[P31]参考株划为一簇。血型抗原受体结合位点(HBGAs)分析表明2014年以后的毒株在SiteⅡ发生了氨基酸突变Asp372Asn。通过抗原表位分析,2017年以后的毒株,在A表位(297、372和373)、B表位(333)、E表位(414)和H表位(309、310)都发生了变化;2020年的毒株20HN261和20HN253株在A表位(368)和G表位(355)较之前的毒株出现了新变化。结论本研究确定了我国流行株GⅡ.4 Sydney[P31]基因组关键位点变异情况,跟踪新毒株的出现提供了科学依据,为针对我国流行株疫苗研发设计提供了基础数据。

摘要：为设计来自抗体的短肽 ,以抗肿瘤坏死因子 (TNF)嵌合抗体 (cA2 )CDRs为模板 ,在其两侧各加 3个随机氨基酸残基 ( X3 CDR X3 ) ,构建了 6个以CDR为基础的肽库 .经过 3轮亲和选择 ,挑取单克隆 ,进一步经ELISA检测TNF阳性噬菌体克隆 ,分离得到 7个ELISA阳性较好的噬菌体肽克隆 ,分别命名为CDR2L1、CDR2L2、CDR2L3、CDR1L1、CDR2H1、CDR3H1、CDR3H 2 .应用MTT方法 ,检测 7个克隆对TNF生物学活性的拮抗作用 .结果显示 :来自CDR2L ,CDR3H肽库中的CDR2L2、CDR2L3,CDR3H2噬菌体肽具有明显的拮抗TNF诱导L92 9细胞的细胞毒作用 ,其中以CDR2L2噬菌体肽的拮抗活性最强 .而来源于CDR1L ,CDR2H肽库的CDR1L1和CDR2H1噬菌体肽和来自CDR2L ,CDR3H肽库中的CDR2L1和CDR3H1噬菌体肽没有明显的拮抗TNF作用 .研究结果初步表明 :从cA2抗体CDR肽库中筛选得到的噬菌体CDR模拟肽具有亲本抗体相似的结合活性和生物学效应 ,从而为开发已知抗体 (特别是治疗用抗体 )

摘要：目的在大肠埃希菌中高效表达重组人干扰素λ2(rhIFNλ2),并对其抗病毒活性进行初步研究。方法根据大肠埃希菌的偏爱密码子人工设计合成人干扰素λ2(hIFNλ2)的高表达基因,将其克隆到原核表达载体pBV220,在大肠埃希菌中进行表达,表达产物经变性、复性、阳离子交换层析及分子筛层析纯化,测定其抗病毒活性、种属特异性及抗HBV活性。结果在大肠埃希菌表达的目的蛋白占细胞总蛋白量的15%左右,纯化后的纯度达到90%以上,在WISH细胞上抗VSV活性约为1.5×106IU/mg。与rhIFNα2b比较,表达产物在非灵长类细胞上的抗病毒活性较在灵长类细胞上弱,目的蛋白在HepG2.2.15细胞上表现有与rhIFNα2b相似的抗HBV活性。结论hIFNλ2可以在大肠埃希菌内实现高效表达,表达产物具有抗病毒活性,有与rhIFNα2b相似的抗HBV活性,本型IFN有较严格的种属特异性。

摘要：目的原核表达GII.4基因型人诺如病毒(human norovirus, HuNoV)次要衣壳蛋白VP2并制备多克隆抗体。方法设计特异性引物扩增GII.4 HuNoV的VP2全基因, 酶切连接至原核表达载体pGEX-6P-1, 将鉴定正确的重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞。挑取单克隆摇菌, 加入IPTG诱导重组GST-VP2融合蛋白的表达, 经GST亲和层析纯化和酶切, 获得GII.4 HuNoV VP2蛋白。通过SDS-PAGE分析纯化后HuNoV VP2蛋白相对分子质量。将纯化的GII.4 HuNoV VP2蛋白(0.5 mg/ml)免疫BALB/c小鼠, 制备多克隆抗体。结果 GII.4 HuNoV VP2蛋白被成功表达和纯化, 相对分子质量(Mr.×103)约29。将GII.4 HuNoV VP2蛋白免疫BALB/c小鼠制备的多克隆抗体滴度高达1∶1 280 000。Western blot与间接ELISA分析显示该多克隆抗体能和GII.4 HuNoV VP2抗原特异性结合。结论利用原核表达系统成功表达了GII.4 HuNoV VP2蛋白, 并成功制备出高效价GII.4 HuNoV VP2多克隆抗体。