摘要：目的建立改进的四引物扩增受阻突变体系PCR（T－ARMS－PCR）检测方法，实现单管一次性检测叶酸代谢过程相关的4个单核苷酸多态性（SNP）位点：rs1801133，rs1801131，rs1805087和rs1801394。方法方法学建立。于2017年1至4月在河北省儿童医院检验科收集150名体检儿童抗凝全血标本以待验证。利用T－ARMS－PCR原理及多重嵌合引物策略设计rs1801133、rs1801131、rs1805087及rs1801394的特异性内外嵌合引物。通过优化引物浓度和反应条件，经单管PCR反应，结合QIAxcel毛细管电泳分析扩增产物长度，判读150份标本的SNP基因型，同时所有标本经测序法进一步验证。利用SPSS 17.0统计软件卡方检验对150份标本的4个SNP位点分别进行哈迪－温伯格遗传平衡（HWE）检测。结果改进的T－ARMS－PCR结合毛细管电泳分析的方法可在3 h内一次性识别本研究中叶酸代谢过程相关的4个SNP位点的8个不同等位基因，可对150份全血标本的SNP位点准确分型，其分型结果与测序法完全相符。4个SNP位点基因型的分布均符合HWE平衡定律（χ^2rs1801133＝0.69, Prs1801133＝0.40; χ^2rs1801131＝0.21, Prs1801131＝0.64; χ^2rs1805087＝3.32, Prs1805087＝0.07; χ^2rs1801394＝1.91, Prs1801394＝0.17）。结论本研究建立的改进的T－ARMS－PCR结合毛细管电泳分析方法，可准确地同时检测叶酸代谢过程相关的4个SNP位点，为指导人群特异性地补充叶酸提供了一种可能的技术手段。

摘要：目的研究社区获得性肺炎患者病原微生物分布情况。方法选择2017年1月至2018年1月在本院急诊科治疗的确诊为社区获得性肺炎(CAP)的患者257例,采用自行设计的调查表研究患者基本资料,收集患者痰标本和血液标本进行微生物检测。结果入选患者中年龄≥60岁者比例明显高于18~44岁及45~59岁患者。年龄≥60岁的患者中高血压、冠心病、糖尿病、COPD、肾功能不全、入院前抗生素使用、BMI≤18.5,CURB-65≥2的比例明显高于18~44岁及45~59岁患者。嗜肺军团菌(11.28%)是患者最常见的病原体,其次为流感病毒(10.51%)。其余检出病原体为铜绿假单胞菌(9.34%)、大肠埃希菌(8.95%)、金黄色葡萄球菌(8.56%)、支原体(5.84%)、鲍曼不动杆菌(5.06%)、肺炎衣原体(5.06%)、阴沟肠杆菌(2.72%)、克雷伯杆菌(2.72%)、肺炎链球菌(2.72%),嗜麦芽假单胞菌(2.33%)、产气肠杆菌(1.17%)、流感嗜血杆菌(0.78%)、溶血链球菌(0.39%)。≥60岁患者中嗜肺军团菌、流感病毒、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌感染的比例明显高于18~44岁及45~59岁患者。结论 CAP主要发病于60岁以上的患者,糖尿病、高血压、肾功能不全等合并症可能是CAP的危险因素。嗜肺军团菌、流感病毒、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、支原体、鲍曼不动杆菌等是CAP的主要病原微生物。

摘要：目的建立可快速检测MTB rpoB基因516位点突变的探针导向重组酶介导等温扩增法(probedirected recombinase amplification,PDRA)。方法设计4条探针[1条野生型探针(P-W)及3条突变型探针(P-GGC、P-GTC、P-TAC)]和1条共同的下游引物,分别构建TB-516-W、TB-516-GGC、TB-516-GTC和TB-516-TAC4种检测体系,在39℃条件下恒温扩增40 min。通过阳性阈值时间判定MTB rpoB基因516位点是否发生突变及其突变类型;通过同一探针检测对应的重组质粒确定该检测体系的敏感度;通过不同探针检测某一种重组质粒,根据阳性阈值时间确定该检测体系的特异度。应用建立的PDRA方法检测6株利福平耐药MTB菌株和35份MTB培养阳性的痰标本,并与一代测序结果进行比较。结果 4种检测体系检测对应重组质粒的敏感度为1000拷贝/μl。4种检测体系的特异度良好,探针与靶序列完全匹配时,阳性阈值时间早;探针与靶序列不完全匹配时,阳性阈值时间晚,具有稳定的阳性阈值时间差值,体系TB-516 W,TB-516-GGC,TB-516-GTC和TB-516-TAC的阳性阈值时间差值分别为7.0、5.8、10.0、7.0 min。PDRA检测6株MTB利福平耐药菌株和35份MTB培养阳性痰标本的结果与测序结果一致。结论本研究初步建立了可应用于MTB利福平耐药rpoB基因516位点突变检测的PDRA方法,该方法检测敏感度高,特异度好,具有一定的实验室应用价值。