摘要：目的建立组织工程心肌研究中系统观察免疫组化检测结果的程序与方法。方法取新生大鼠心脏制作石蜡组织切片;用0.25%胰酶消化法分离原代新生大鼠心肌细胞,一部分进行细胞爬片培养,一部分与液态胶原混合构建组织工程心肌并施加力学拉伸刺激,制作组织工程心肌石蜡组织切片。对三者分别进行心肌肌钙蛋白T(cTnT)及细胞间隙连接蛋白43(Cx43)抗体的免疫组化染色。比较观察天然心肌组织、体外培养心肌细胞及组织工程心肌组织免疫组化的检测结果,对其形态结构的变化进行综合分析。分别选取5个不同视野对细胞总数和cTnT阳性细胞进行计数,计算百分比。在细胞和再造心肌组织培养过程中观察自发收缩的细胞区域与cTnT着色区域的关系。结果天然心肌和组织工程心肌切片分别反映了天然在体心肌和体外构建心肌的细胞形态和组织结构特征;心肌细胞爬片显示了体外心肌细胞与非心肌细胞的形态,以及随体外培养时间的延长其形态和数量比例的改变。细胞在体外培养时间越长,成纤维细胞比例越高。尽早将分离的原代新生大鼠心肌细胞与液态胶原混合体外再造心肌组织进行三维拉伸培养有助于抑制其中的成纤维细胞的增殖速度。将分离细胞爬片培养4h后可相继观察到能自发收缩的细胞,其收缩区域与染色片中cTnT的着色区域基本相符;再造的组织工程心肌的收缩自拉伸后48h开始,逐渐从单个细胞到肌束再到整条再造心肌,频率逐渐加快,从1～2/min到5～10/min。结论建立了观察与分析组织工程心肌免疫组化结果的程序和方法,为优化实验设计与条件提供了客观参数,也为构建其他组织的形态学观察与分析方法提供了有利借鉴。

摘要：目的 :5 -氮胞苷作为分化诱导剂 ,初步探讨其单独或联合全反式维甲酸应用时对小鼠胚胎干细胞(mESC)分化为心肌细胞的影响 ,旨在建立一种体外诱导mESC分化为心肌细胞的实验方法。方法 :采用MTT法确定 5 -氮胞苷的非细胞毒性参考剂量。设计不同条件培养基 (5 -氮胞苷单独或配伍全反式维甲酸应用 )对mESC进行诱导分化 ,并通过免疫组化技术及RT -PCR方法等对分化细胞进行鉴定。结果 :5 -氮胞苷的非细胞毒性参考剂量为 8μmol/L ,能够诱导mESC分化为心肌合胞体 (与阴性对照组比较 ,P 0 0 5 ) :即对ESC向心肌细胞的诱导分化没有促进作用。结论 :5 -氮胞苷能够诱导mESC分化为心肌合胞体 ,从而得以建立一种体外诱导mESC分化为心肌细胞的方法。

摘要：目的分析埃博拉病毒核蛋白（NP）抗原表位,克隆表达埃博拉病毒NP抗原,为免疫学诊断试剂的研究奠定基础。方法采用BioSun生物学软件预测分析埃博拉病毒NP抗原的氨基酸表位区间,采用大肠杆菌优势密码子反向翻译成基因序列,采用PCR退火合成法合成NP优势密码子抗原基因,并利用载体pBVIL1进行克隆表达。采用间接ELISA技术评价获得NP抗原的特异性。结果确定埃博拉病毒NP抗原的氨基酸表位位于360~739 aa,共设计36条引物,扩增合成1140 bp的NP抗原基因,克隆表达后,融合蛋白相对分子质量为58×10^3,测序结果显示插入的NP基因正确。初步结果显示,NP抗原的特异性为99.24%（130/131）。结论获得埃博拉病毒NP抗原,为进一步研制特异的埃博拉病毒快速诊断试剂提供了抗原储备。

摘要：设计并制备出一套低成本的微电极阵列及多通道电生理检测系统。通过基本的光刻、腐蚀对ITO导电玻璃进行加工,制备带有电极图形的导电玻璃,复合一层绝缘层后获得微电极阵列。利用软件设计PCB电路图并委托公司加工,获得相关系统的硬件部分。在labVIEW平台下进行编程,满足对数据采集卡的操作。我们成功制备了一套低成本的微电极阵列及相关检测系统。该系统用于不同类型神经细胞组成的神经网络自发放电检测,可在体外培养的神经网络中检测到5μV的神经信号,并在神经网络发育14 d检测到密集的同步簇发动作电位。我们研发的微电极阵列及多通道电生理检测系统具有良好的性能,可用于不同类型神经细胞的神经网络微弱信号的检测与神经网络发育研究。