摘要：背景药物性肝损伤是仅次于病毒性肝炎和脂肪性肝病的第3大肝脏疾病,及时诊断并给予有效治疗是阻断疾病进展、提高治愈率的关键。苦黄制剂已被广泛应用于治疗各种原因导致的急慢性肝炎,尤其是伴有黄疸的患者,其临床疗效及安全性确切。但是,尚缺乏对急性药物性肝损伤患者保肝退黄疗效和安全性的循证医学证据。目的评价苦黄注射液序贯苦黄颗粒治疗药物性肝损伤的疗效及安全性。方法采用随机、阳性对照、非劣效性试验设计,选择2021年11月—2023年9月在首都医科大学附属北京佑安医院诊断为急性药物性肝损伤患者93例,采用单中心随机化的方法,将患者随机分配到试验组(49例)和对照组(44例)。在常规保肝治疗4周的基础上,试验组和对照组分别应用苦黄注射液/注射用丁二磺酸腺苷蛋氨酸治疗2周,再改用苦黄颗粒/丁二磺酸腺苷蛋氨酸肠溶片治疗2周。比较两组患者入组时、治疗2周、治疗4周的退黄有效率、主要肝功能指标[丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰转移酶(GGT)、总胆红素(TBIL)、总胆汁酸(TBA)]水平变化及其复常率。结果治疗期间共脱落4例患者,其中试验组3例,对照组1例。两组治疗2、4周后退黄有效率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。两组治疗2、4周时ALT、AST、ALP、GGT、TBIL、TBA比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。两组治疗2、4周时ALT、AST、ALP、GGT、TBIL复常率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论苦黄注射液序贯苦黄颗粒治疗药物性肝损伤疗效确切,安全性良好,非劣效于注射用丁二磺酸腺苷蛋氨酸序贯丁二磺酸腺苷蛋氨酸肠溶片。

摘要：目的建立一种用于检测HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)的微滴数字PCR(ddPCR)方法。方法构建HBV cccDNA标准品,利用HBV cccDNA和松弛环状DNA(rcDNA)在结构上存在的差异,设计HBV cccDNA引物和探针,通过扩增HBV质粒得到HBV cccDNA标准品,把梯度稀释后的标准品作为HBV cccDNA检测的模板,建立ddPCR检测方法,并分析此方法的检出限和重复性;收集2017年6月—2020年10月在首都医科大学附属北京佑安医院就诊的20例临床患者的肝组织样本,均诊断为HBV感染,提取样本的DNA,利用质粒安全性ATP依赖的DNA酶(PSAD)进行酶切,得到HBV cccDNA模板,对ddPCR检测方法进行临床样本的评价,并与实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法作对比。计数资料两组间比较采用χ^(2)检验。结果建立了基于ddPCR的HBV cccDNA检测方法,梯度稀释的HBV cccDNA标准品均能准确检出,检出限为1拷贝/μl,其中1×10^(3)、1×10^(2)、1×10^(1)拷贝/μl标准品的变异系数分别为4.41%、3.98%、5.09%;检测20例临床HBV患者样本的HBV cccDNA,ddPCR检测方法能检出17例,阳性率为85%,qPCR检测方法能检出11例,阳性率为55%,两组比较差异有统计学意义(χ^(2)=4.286,P=0.038)。结论建立的ddPCR检测HBV cccDNA方法具有较低的检出限和较好的重复性,为进一步的临床检测提供了有效的工具。

摘要：目的以临床诊疗数据评估核苷（酸）类和干扰素类药物初治HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者的HBsAg清除率及其影响因素。方法采用回顾性队列研究设计，以2008年2月14日至2012年12月31日于北京佑安医院门诊就诊的1767例HBeAg阳性慢性乙型肝炎初治患者为研究对象，计算不同特征患者的HBsAg清除率，同时采用COX回归模型探讨HBsAg清除的影响因素。结果1767名患者总HBsAg年清除率为0．46％。阿德福韦组、恩替卡韦组、替比夫定组、普通干扰素组的HBsAg年清除率分别为0．52％、0．47％、0．45％和1．18％。拉米夫定组和聚乙二醇干扰素α组未观察到HBsAg清除者，可能与观察人数较少有关。单因素分析结果显示HBsAg清除率与就诊时的年龄、基线HBsAg滴度水平有关。在校正了其他因素后仍然观察到使用普通干扰素者发生HBsAg清除的可能性显著高于恩替卡韦治疗者（ErR=8．33，95％CI：1．19～58．50，P：0．0329），其他核苷（酸）类药物组与恩替卡韦组差异无统计学意义。患者年龄超过50岁发生HBsAg清除的概率是50岁以下者的4．92倍（HR=4．92，95％CI：1．38～17．50，P=0．0139）；基线HBsAg滴度水平〈3 log10IU／ml发生HBsAg清除的概率较≥3log10IU／ml者升高22．77倍（ErR=23．77，95％CI，：6．17～91．51，P〈0．0001）。结论HBeAg阳性慢性乙型肝炎卡刀治患者在目前抗病毒药物治疗方案下HBsAg年清除率低，尤其是核苷（酸）类药物；基线HBsAg滴度水平与HBsAg清除密切相关。

摘要：目的建立基于微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)技术检测HBV DNA的方法,并实现对乙型肝炎低病毒血症患者HBV DNA的精准检测。方法构建pUC57-HBV质粒作为阳性对照质粒,设计合成HBV DNA ddPCR引物及探针,以梯度稀释的阳性对照质粒为模板进行ddPCR检测,完成标准曲线构建和检出限分析,并进行检测的重复性和特异性分析。收集首都医科大学附属北京佑安医院19例乙型肝炎低病毒血症患者的血浆样本(HBV DNA<10 IU/mL),提取HBV DNA后进行ddPCR检测。结果建立的基于ddPCR技术检测HBV DNA的方法检测下限低至1 copy/μL(阳性质粒稀释法);对3种不同拷贝的阳性对照质粒(1×10^(2)、1×10^(1)、1×10^(0) copies/μL)重复检测的变异系数分别为18.8%、9.9%、9.7%,且具有100%特异性;应用该方法在低于临床检测下限的乙型肝炎低病毒血症患者中,以1 copy/μL为临界值,HBV DNA的阳性检出率为68.42%。结论建立的ddPCR检测低病毒载量HBV DNA检测方法能够高灵敏和高特异地对乙型肝炎低病毒血症患者HBV DNA实现绝对定量。

摘要：目的了解北京市某区各级医疗机构慢性乙型肝炎(乙肝)诊疗现状,为制定有效的乙肝防控政策与措施提供参考。方法分别抽取该区流动人口400名、肝病患者280名、肝病医生64名,采用不记名问卷调查法,用自行设计的调查问卷进行调查,了解其乙肝相关知识知晓情况(不同调查对象调查内容与重点不同)及各级医疗机构乙肝诊疗能力。结果 400名流动人口中,知晓乙肝症状者137名(34.3%),知晓乙肝传播途径者146名(36.5%),知晓乙肝加重诱因者166名(41.5%),知晓乙肝向肝硬化或肝癌转化率者205名(51.2%),知晓接种乙肝疫苗者112名(28.0%)。280名肝病患者中,知晓乙肝症状者258名(92.1%),知晓乙肝传播途径者253名(90.3%),知晓肝硬化病因者279名(99.6%),知晓肝病加重因素者256名(91.4%);门诊定期复查者(至少每年1次)177名(63.3%)。64名肝病医生中,知晓乙肝诊断知识者64名(100%),知晓大三阳定义者61名(95.3%),知晓干扰素适应证者61名(95.3%),知晓干扰素不良反应者48名(75.0%),知晓母婴阻断者61名(95.3%)。该区42家医院中,二级及三级医院肝病专科医生平均为(3±1)名;一级医院无肝病专科医生,乙肝相关检查项目不全,且未配备抗病毒药物。结论该区流动人口肝病相关知识知晓率低,肝病患者乙肝知识及健康行为不能知行合一,肝病医生诊疗能力有待提高。应加强该区流动人口乙肝相关知识的科普宣传和肝病患者的健康教育,加强肝病医生乙肝相关知识的培训,从人力、物力资源配置上提高各级医疗机构的乙肝诊疗水平。

摘要：重型肝炎及肝衰竭是威胁广大患者生命的严重疾病,非生物型人工肝在国内外被广泛应用于该病的治疗,然而疗效评价不一。本综述将重点介绍临床应用较多的6种非生物型人工肝的较高等级疗效评价研究的设计方案和研究结果,并结合肝衰竭的病理生理学特点和人工肝原理对其有效性进行分析和横向比较,分析现有人工肝技术的优缺点和适应证。此外,还总结了非生物型人工肝临床应用的安全性及对策,并归纳了未来该领域在技术和临床研究方面的需求和发展趋势。

摘要：目的研究内质网应激在D-氨基半乳糖／脂多糖联合注射诱导小鼠急性肝衰竭致病机制中的作用。方法以C57BL／6小鼠为研究对象，腹腔注射D-氨基半乳糖／脂多糖建立小鼠急性肝衰竭模型。动物分为对照组、急性肝衰竭模型组、4-丁酸苯酯干预组（建模前6h腹腔注射）。Westemblot方法检测肝组织内质网应激标志物蛋白表达水平，检测血清ALT、AST水平评价肝脏功能，观察肝脏组织病理学变化评价肝脏损伤情况，实时荧光定量PCR检测肝细胞炎症因子如肿瘤坏死因子（TNF）α、白细胞介素（IL）-6和IL-1β基因表达情况，凋亡细胞原位末端转移酶标记试验法检测肝细胞凋亡情况。多组间均数比较采用单因素方差分析，两样本均数比较采用成组设计t检验；对于小鼠的生存分析，应用两两比较的Logrank检验。结果Westernblot方法结果显示，内质网应激蛋白标志物葡萄糖调节蛋白78和葡萄糖调节蛋白94随着急性肝衰竭的进展表达水平逐渐升高；非折叠蛋白反应蛋白1型内质网跨膜蛋白激酶1α、X盒结合蛋白1、活化转录因子6在急性肝衰竭早期被激活，而内质网应激诱导的凋亡蛋白CCAAT／增强子结合蛋白同源蛋白和caspasel2在急性肝衰竭晚期表达升高。4-丁酸苯酯抑制内质网应激可显著改善肝炎症[ALT：（1227．7±301．1）u／L与（727．5±412．5）u／L，P〈0．05；AST：（1682．9±580．2）u／L与（744．9±267．5）U／L，P〈0．051，并且抑制炎症因子的表达（TNFα：1．55±0．47与0．63±0．20，P〈0．05；IL-1β：7．39±2．03与4．51±1．44，P〈0．05；IL-6：0．43±0．14与0．18±0．03，P〈0．05）；凋亡细胞原位末端转移酶标记试验和Westemblot方法研究结果表明，4-丁酸苯酯干预内质网应激可显著抑制肝细胞凋亡，并降低了剪切型caspase3表达。结论内质网应激在D-氨基半乳糖／脂多糖诱导小鼠急性肝衰竭过程中承担着关键作用，抑制内质网应激通过降低炎症反应和肝细胞凋亡从而改善肝损伤。

摘要：目的设计并筛选针对大鼠Smad3基因的siRNA,构建靶向Smad3基因的shRNA重组慢病毒。方法针对大鼠Smad3基因设计并合成6对siRNA(siRNA001～006)及1对无关对照siRNA,转染大鼠肝细胞株BRL-3A,应用Western Blot检测各siRNA对SMAD3蛋白表达的抑制作用,挑选抑制效率高的siRNA。依据所得的序列合成并克隆到pLL3.7载体中,与包装质粒pRSV-rev、pMDLg-pRRE和VSV-G共转染293FT细胞获得靶向Smad3的慢病毒。通过流式细胞仪绿色荧光蛋白(GFP)荧光计数来检测病毒滴度。结果 Western Blot检测证实siRNA001、siRNA005、siRNA006对SMAD3蛋白表达的抑制作用明显,抑制率分别可达83.36%、86.99%及64.88%,而对照siRNA无明显作用。酶切和测序结果显示Smad3 shRNA及对照shRNA重组载体质粒pLL3.7-shRNA构建成功,将构建的质粒进行慢病毒包装可产生有感染活性的慢病毒颗粒。结论筛选出针对大鼠Smad3基因有明显抑制作用的3对siRNA,并成功构建表达相应shRNA的4种重组慢病毒,为研究调控Smad3的表达对肝再生或肝纤维化的影响提供了实验条件。