摘要：目的:研究高温连接酶检测反应技术(LDR)技术检测乙肝病毒拉米夫定耐药和阿德福韦耐药突变的可行性.方法:应用LDR技术和多聚酶链式反应(PCR)技术,在乙肝病毒基因相关区域设计引物和探针检测突变位点.结果:该方法能很好的区分野生型质粒和突变型质粒;90例临床样本的测序结果与LDR检测结果基本一致.结论:LDR技术可以应用于临床乙肝病毒样本的拉米夫定耐药和阿德福韦耐药的检测.

摘要：目的建立一种TaqMan探针的实时PCR检测乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(cccDNA)方案。方法根据rcDNA与cccDNA结构差异,在缺口两侧设计引物,应用TaqMan探针分析,加入1种可以去除rcDNA和部分扩增产物的依赖ATP的内切酶(Plasmid-Safe ATP-dependent DNase)。结果通过高速离心获得病毒单质颗粒验证了该方案的特异性;通过克隆和酶切得到3.2 kb的环状DNA验证了方案的灵敏性。乙肝患者血清、肝组织cccDNA占总HBV DNA的比例分别为0.03%～0.81%、0.4%～28.0%。结论成功地建立了以TaqMan探针检测血清和肝组织HBV cccDNA的实时PCR检测方法。

摘要：目的研究PCR-连接酶检测反应(Ligase detection reaction,LDR)技术对EGFR变异检测的可行性。方法运用多重PCR和多重LDR的技术原理,根据EGFR基因19、20和21外显子4个变异位点,设计引物、探针,研究最适反应条件;同时构建相应阳性质粒,比较PCR-LDR法与测序法的一致性。结果利用测序法验证了PCR-LDR法检测EGFR变异的准确性。检测32份临床样本,其中10份样本出现EGFR变异。结论PCR-LDR法检测EGFR变异可以用于临床样本的检测。