摘要：目的:构建靶向乙肝病毒X基因(HBX)的shRNA表达载体pSilencer3.1-shHBX,并应用其体外抑制HBX促HepG2细胞凋亡的作用。方法:设计并构建靶向HBX的shRNA表达载体pSilencer3.1-shHBX,脂质体转染法将HBX表达载体pcDNA3.1-HBX与pSilencer3.1-shHBX共转染人肝癌HepG2细胞,培养72小时后,分别以RT-PCR、Western blot和免疫荧光检测HBX的表达量。Annexin V-FITC/PI双染经流式细胞仪检测细胞的凋亡变化。结果:重组质粒pSilencer3.1-shHBX酶切鉴定和测序结果均与设计的一致。该质粒使HBX基因mRNA表达量降低了47.1%,进而使HBx蛋白表达量降低了58.9%,HBx蛋白荧光强度减弱,并使HBX诱导的HepG2细胞凋亡率降低了52.11%。而阴性对照质粒无此作用。结论:成功构建靶向HBXshRNA表达载体pSilencer3.1-shHBX,并可应用其抑制HBX促HepG2细胞凋亡的作用。

摘要：目的设计家蝇抗真菌肽MAF-1A衍生肽Mt6-21DLeu,探讨其抗白色念珠菌(Candida albicans,Ca)活性及作用机制。方法通过氨基酸替换法设计MAF-1A衍生肽Mt6-21DLeu;采用微量液体稀释法测定Mt6-21DLeu对Ca的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MFC)以及不同环境中Mt6-21DLeu对Ca抑菌活性的变化;通过时间-杀菌曲线反映Mt6-21DLeu对Ca的杀菌动力学;通过结晶紫染色测定Mt6-21DLeu对Ca不同阶段生物被膜的清除作用;采用多功能酶标仪检测荧光探针DPH的相对荧光密度;荧光显微镜观察Mt6-21DLeu的细胞膜通透性;采用流式细胞仪检测Mt6-21DLeu影响Ca活性氧ROS生成的影响。结果与MAF-1A相比,Mt6-21DLeu抑制Ca生长的效果提高近5倍,其MIC和MFC分别为0.128 mg/ml和0.256 mg/ml。在盐离子环境中,Mt6-21DLeu活性几乎不受影响,胰酶环境对Mt6-21DLeu有所抑制但远小于对MAF-1A活性的干扰。时间-杀菌曲线结果显示在MIC和2 MIC浓度下,Mt6-21DLeu于9 h后逐渐抑制Ca的生长;4 MIC浓度时Mt6-21DLeu的杀菌能力增强。Mt6-21DLeu在4、24、48 h时均能部分清除Ca已形成的生物被膜,清除效果与Mt6-21DLeu的浓度有关;4 MIC浓度的Mt6-21DLeu能显著增加Ca细胞膜的流动性(P<0.01)及通透性,进而引起Ca菌体内ROS的积累。结论衍生肽Mt6-21DLeu能高效、持久、稳定地抑杀Ca,其抗菌作用可能通过增强细胞膜通透性、促进胞内ROS积累的多靶点模式实现。因此,可将Mt6-21DLeu作为治疗Ca感染的候选药物分子。

摘要：目的:克隆肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因片段(114～281氨基酸残基)并构建原核表达载体。方法:取健康人外周血提取总RNA,设计合成引物并引入EcoR I和Xho I酶切位点,RT-PCR扩增TRAIL基因的胞外区片段,克隆入原核表达载体pGEX-6P-1中,经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆。结果:从外周血cDNA中扩增出501 bp的目的片段,测序结果证实成功构建重组质粒pGEX-6P-1/TRAIL。结论:成功构建TRAIL基因的原核表达载体pGEX-6P-1/TRAIL,为肿瘤细胞的凋亡研究提供理论依据。

摘要：目的构建靶向乙型肝炎病毒X基因(HBX)的shRNA表达载体pSilencer3.1-shHBX,观察其体外抑制HBX在HepG2细胞中表达的作用,为应用RNA干扰技术进一步研究HBX基因的功能奠定基础。方法设计并构建靶向HBX的shRNA表达载体pSilencer3.1-shHBX,脂质体转染法将HBX表达载体pcDNA3.1-HBX与pSilencer3.1-shHBX共转染人肝癌HepG2细胞,培养72 h后以RT-PCR检测HBX基因表达情况,以Western blot检测HBX蛋白的表达量。结果经酶切和测序鉴定,构建的重组质粒pSilencer3.1-shHBX与设计一致。该质粒使HBX基因mRNA表达量降低47.1%,使HBx蛋白表达量降低58.9%,而阴性对照质粒无此作用。结论成功构建靶向HBX shRNA表达载体pSilencer3.1-shHBX,该质粒可体外抑制HBX在HepG2细胞中的表达。

摘要：专题式教学在医学教学工作中逐渐得到广泛应用,而新时代下如何利用网络的普及,扬长避短地应用到教学改革中,值得深入探讨。徐州医科大学病原生物学与免疫学教研室提出基于问卷星平台的人体疾病学基础寄生虫内容专题式教学设计,在五个不同专题教学过程中,利用问卷星平台功能,及时快捷掌握教学效果,促进专题式教学更适应时代发展的改革,努力达到培养高素质医学院校非医学专业人才的目的。

摘要：目的：构建c－Jun特异性的shRNA及研究其抑制c－Jun蛋白表达对人类肝癌细胞HepG2增殖和迁移的影响。方法根据c－Jun编码序列设计并构建shRNA质粒，利用LipofectamineTM 2000转染HepG2细胞，荧光显微镜观察转染效率。 Western blot检测其对c－Jun蛋白表达的影响。 CCK－8增殖实验、平板克隆形成实验观察HepG2细胞的增殖情况，transwell和划痕愈合实验方法观察细胞的迁移情况。结果构建了c－Jun小干扰质粒shRNA－1和shRNA－2。荧光显微镜观察到shRNA质粒在HepG2细胞转染效率约在80％。 Western blot显示shRNA－2小干扰质粒对c－Jun抑制效果要强于shRNA－1小干扰质粒。功能实验结果显示，与阴性对照组相比，shRNA－2能显著抑制HepG2细胞的增殖、克隆形成及其迁移能力（P均＜0．05）。结论成功构建了对c－Jun有效shRNA干扰质粒，下调c－Jun的表达能够明显抑制肝癌细胞的增殖和迁移，为进一步研究c－Jun在肝癌中的作用及相关机制提供了工作基础。

摘要：实验教学改革是高等医学教育改革的重要方面,如何在医学教育改革现阶段,配合整体改革趋势,逐步调整现有基础医学实验教学体系与模式,顺应理论教学改革步伐,是当前实验教学改革的课题之一。在病原生物学实验教学中,我们积极探索基于案例的临床思维及实验技术培养体系。依据临床典型案例为引导,引入实验课程基本内容;同时依据临床诊疗及相关科研进展,拓展课程学习要求。落实“早临床、多临床、反复临床”的医学教育构想,打造整合基础医学知识、融入思政内涵的医学实验课程“金课”,提高课程高阶性、创新性及挑战度,促进学生职业素质及创新能力的全面提升。

摘要：目的应用RNA干扰技术沉默细胞内LASP-1蛋白的表达,探讨LASP-1蛋白对人肝癌HepG2细胞增殖和迁移的作用。方法根据LASP-1 mRNA编码序列设计RNA干扰靶点并构建特异性小干扰RNA(siRNA),通过脂质体转染入HepG2细胞,采用Western blot法检测LASP-1蛋白的表达。采用CCK-8增殖实验、平板克隆形成实验、Transwell和划痕愈合实验方法,观察HepG2细胞增殖及迁移情况。结果 (1)LASP-1 siRNA对LASP-1蛋白表达水平有显著的下调作用(P<0.05)。(2)体外实验结果显示,与HepG2组及阴性对照组相比,siRNA组HepG2细胞增殖和克隆形成率明显被抑制(P<0.05),其迁移能力也下降(P<0.05)。结论下调LASP-1蛋白表达可显著抑制HepG2细胞的增殖和迁移能力,提示LASP-1在肝癌细胞恶性增殖和转移过程中具有重要作用,为临床上寻找抑制肝癌增殖转移的靶点提供新的思路和方法。

摘要：《医学微生物学与免疫学》是医学主干课程和桥梁课程,实验教学是本课程的重要组成部分,为了培养医学生应用基础知识解决临床问题的能力,启蒙学生科研意识,提高创新能力,激发学生学习兴趣和提高学习效果,加强学生对理论知识和实验方法的理解和掌握,本团队利用虚拟仿真技术,基于临床案例,自主设计开发了案例引导的虚拟仿真实验—基于人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)合并结核分枝杆菌感染虚拟仿真实验,并用于医学微生物学与免疫学实验教学,通过不断的实践与探索,改进教学方法,取得了较好的教学效果,通过项目的实践和拓展,以期构建线上线下结合的、临床基础融合的实验教学体系,有助于培养符合社会发展需要的优秀医学生。

摘要：目的 研究人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)Tat蛋白在调节人肝细胞脂肪代谢基因表达中的作用。方法 根据人肝脏中调节脂质生成的转录因子固醇调节元件结合蛋白-1c(Serbp1c)和碳水化合物调节元件结合蛋白(ChREBP)及其下游基因(Dgat、Lpk、Fasn和Scd-1)的cDNA碱基序列,设计并合成引物;培养人肝细胞株LO2,PI3K/AKT信号通路抑制剂PD98059预处理,Tat蛋白刺激细胞后,提取不同时间点的细胞总RNA,逆转录生成cDNA,应用定量PCR(q-PCR)检测人肝细胞中Srebp1c和ChREBP及其下游基因Dgat、Lpk、Fasn和Scd-1mRNA转录水平。结果 Tat蛋白显著增强人肝细胞中Srebp1c和ChREBP及其下游基因Dgat、Lpk、Fasn和Scd-1 mRNA表达水平,在刺激6h后达到峰值;而且PI3K/AKT信号通路抑制剂PD98059显著下调Tat诱导的Srebp1c和ChREBP及其下游基因Dgat、Lpk、Fasn和Scd-1基因转录。结论 HIV Tat蛋白在人肝细胞中对脂质生成有促进作用,进而调节肝细胞脂肪代谢。