摘要：目的利用CRISPR/Cas 9系统在人肺癌细胞系A549和H460中获得敲除腺苷单磷酸活化蛋白激酶α1(adenosine monphosphate-activated protein kinase,AMPKα1)的稳定表达细胞系。方法根据CRISPR/Cas 9靶点设计原则,设计三条引导RNA(sgRNA),分别构建AMPKα1-CRISPR/Cas9 KO及其HDR质粒。将质粒转染至A549和H460细胞后,筛选稳定的单克隆细胞株。用Western blot鉴定筛选获得的肺癌细胞株是否表达AMPKα1。实验被分为原始对照组和敲除组,采用MTT法检测AMPKα1的肺癌细胞增殖情况。结果经过CRISPR/Cas 9系统处理后,筛选获得的A549和H460敲除AMPKα1稳定细胞株与原始细胞株A549和H460相比,Western blot检测不到AMPKα1蛋白质的表达,差异具有统计学意义(t=137.7,79.17,均P<0.0001)。MTT结果显示,筛选获得的A549和H460敲除AMPKα1的稳定细胞株与原始细胞株A549和H460相比,敲除细胞株的增殖速度明显减弱,差异具有统计学意义(t=3.956~28.16,均P<0.05)。结论CRISPR/Cas 9系统成功建立敲除AMPKα1表达的稳定肺癌细胞株,为进一步研究AMPKα1在肺癌发生发展中的作用提供细胞模型。