摘要：目的　克隆日本血吸虫 14 - 3- 3蛋白 epsilon亚型的编码基因 ,以研究其在血吸虫信号传导及其在免疫预防的作用。方法　以日本血吸虫成虫总 RNA为模板逆转录合成 c DNA链 ,设计合成引物 ,用 PCR法扩增14 - 3- 3蛋白 epsilon亚型基因编码序列 ,将其克隆入 p GEM- T载体 ,并用双酶切和以质粒为模板的 PCR进行鉴定。结果　 RT- PCR扩增出一条约 75 3bp大小的特异性条带 ,重组质粒的双酶切和以质粒为模板的 PCR均获得了一条与 RT- PCR扩增出大小相同条带 ,序列测定结果表明其具有 75 3bp的开放阅读框 ,并具蛋白激酶、酪氨酸激酶磷酸化位点。结论　成功构建了日本血吸虫 14 - 3- 3蛋白 epsilon亚型重组 p GEM- T克隆载体 ,为进一步的研究提供了条件。

摘要：目的　体外扩增弓形虫RH株信号转导蛋白 14 3 3 (Toxo 14 3 3 )基因编码序列 ,构建原核表达质粒 ,并表达Toxo 14 3 3。　方法　收集、纯化弓形虫RH株速殖子 ,提取RNA ,在设计合成的引物中引入EcoRI和XhoI酶切位点。应用RT PCR扩增Toxo 14 3 3基因片段 ,插入原核表达质粒 pET2 8a中 ,重组子双酶切、PCR和测序鉴定 ,转化大肠杆菌BL2 1并以异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导表达。　 结果　从弓形虫RH株RNA中扩增出 80 3bp的Toxo14 3 3基因片段 ,构建重组质粒 pET2 8a/14 3 3 ;IPTG诱导 ,SDS PAGE显示表达产物的大小约 3 0 .7kDa ,Western印迹鉴定为Toxo 14 3 3。　结论　成功地从弓形虫RH株基因组DNA中获取了 14 3 3基因 ,构建了 pET2 8a/Toxo 14 3 3重组质粒 ,并获得高效表达。

摘要：为了寻找日本血吸虫病新的诊断和候选疫苗分子 ,设计合成引物 ,以日本血吸虫成虫cDNA第一链为模板 ,用PCR法扩增出日本血吸虫 14 - 3 - 3抗原 (Sj14 - 3 - 3 )基因编码序列 ,其大小约 784bp ,将其克隆入pGEM -T载体 ,重组质粒pGEM -T -Sj14 - 3 - 3经双酶切和以质粒为模板进行PCR扩增 ,均可获得一条与PCR产物一致的DNA片段 ,序列测定结果表明具有一个长度为 765bp的完整开放阅读框 ,与曼氏血吸虫 14 - 3 - 3核苷酸序列有高度同源性。本实验克隆了日本血吸虫 14 - 3 - 3抗原的编码基因 ,并进行了序列测定 ,为进一步研究提供了条件。

摘要：目的　为了寻找新的预防日本血吸虫病的候选疫苗分子。方法　设计合成引物 ,以日本血吸虫成虫基因组DNA为模板 ,用PCR法扩增出丝氨酸蛋白酶 (Sp)基因编码序列 ,其大小约 45 0bp ,将其克隆入pGEM T载体 ,进行序列测定 ,并将Sp基因克隆入真核表达载体 pBKCMV中。 结果　PCR法扩增出SjSp基因编码序列 ,其大小约 45 0bp ,重组质粒 pGEM T Sp和 pBK Sp经双酶切和以质粒为模板进行PCR扩增 ,均可获得一条与PCR产物一致的DNA片段 ,序列测定结果表明具有一个长度为 42 7bp的不完整开放阅读框 ,其与曼氏血吸虫丝氨酸蛋白酶 (SmSp1)具有高度同源性。 结论　本文首次报道了日本积压吸虫丝氨酸蛋白酶 (SjSp)的部分基因编码序列 ,并克隆入了真核表达载体 pBKCMV中 ,为进一步研究提供了条件。

摘要：目的　寻找新的预防日本血吸虫感染疫苗候选分子。　方法　用具保护性的抗血吸虫膜单抗及免疫血清筛选日本血吸虫 c DNA文库 ,PCR扩增 c DNA插入片段 ,A - T连接法将筛选获得的 3个基因片段克隆到p GEM- T载体上 ,自动测序仪测序 ,序列送 BL AST基因服务站进行同源性分析。重新设计引物扩增编号为 B8克隆的开放阅读框碱基序列 ,先将其克隆入 p GEM- T载体质粒 ,再定向亚克隆入 p BK- CMV表达质粒 ,IPTG诱导表达后用 SDS- PAGE和 Western blotting分析表达产物。　结果　经双酶切及 PCR法均证实基因重组成功。其特异性表达产物约为 10 .6 k Da蛋白抗原。表达产物可被免疫血清及单抗识别。　结论　构建了编码日本血吸虫 10 .6k Da蛋白基因表达克隆。

摘要：目的克隆、表达及鉴定弓形虫(RH株)微线体分泌蛋白TgMIC10编码基因,为建立一种灵敏检测弓形虫感染的实验方法作准备。方法提取弓形虫速殖子总RNA,设计并合成引物,RT-PCR扩增TgMIC10编码基因,与克隆载体pGEM-T连接,经酶切和PCR鉴定及DNA测序证实后,亚克隆入表达载体pBK-CMV,IPTG诱导表达pBK-TgMIC10阳性重组子转化宿主菌***21,Western blot鉴定。结果PCR法扩增出了一597bp左右的DNA片断,将重组质粒pGEM-TgMIC10、pBK-TgMIC10分别作EcoRI和XbaI双酶切,均能得到一个大小与PCR扩增产物一致的插入片断,表明Tg-MIC10基因的克隆和亚克隆均获成功,用IPTG诱导带有重组质粒pBK-TgMIC10的大肠杆菌,产物行SDS-PAGE,可得到一约21kDa融合蛋白,Western-blot法鉴定该蛋白能被弓形虫感染的兔血清所识别。

摘要：目的　运用免疫学方法筛选日本血吸虫 (中国大陆株 )童虫cDNA文库 ,寻找血吸虫新基因 ,并克隆和鉴定一个日本血吸虫决定性别的Magonashi样蛋白基因。方法　用混合的血吸虫感染者血清免疫学筛选日本血吸虫童虫cDNA文库 ,随机挑取阳性重组克隆进行测序 ,以获得血吸虫基因 ,并通过BLAST程序进行比较及同源性分析 ,根据分析结果设计合成引物 ,用PCR法扩增出日本血吸虫Magonashi样蛋白基因 (SiM)编码序列 ,将其克隆入pGEM T载体和 pBKCMV载体 ,用双酶切、以质粒为模板进行PCR扩增和测序进行鉴定。结果　本研究共挑取 7个阳性克隆 ,通过测序获得了 5个有表达序列标签(ExpressedSequenceTag .EST)价值的序列 ,并进行了同源性分析 ;用PCR法扩增出大小为 4 4 1bpSjM开放阅读框 ,重组质粒pGEM SjM和 pBKCMV SjM经双酶切均可获得一条为PCR产物一致的DNA片段。 结论　本实验获得了 5个有EST价值的序列 ,并成功地克隆了其中SjM编码基因。

摘要：目的　探讨重组弓形虫信号转导蛋白14- 3- 3(Toxo14- 3- 3)在弓形虫病免疫诊断中的价值。方法　根据弓形虫Beverly株猫肠上皮细胞增殖阶段的14- 3 -3编码基因,设计合成引物,自RH株速殖子基因组克隆Toxo14- 3 -3的ORF,克隆pET 28a质粒,转化大肠杆菌,获得表达产物并纯化融合蛋白,以此抗原包被反应板进行ELISA检测,并与粗制抗原及市售试剂进行比较。结果　对400份血清标本的平行检测,Toxo14 -3 -3抗原、粗制抗原和市售试剂盒的阳性率分别为2 5%、3 0%和3 .25%,三者之间差异无显著性(P>0 .05);三者之间的符合率为99 0%、98.8%和99 .0%,差异无显著性(P>0. 05 )。结论　重组Toxo14 -3- 3抗原检测弓形虫血清抗体具有潜在价值。

摘要：目的　克隆与鉴定弓形虫 14- 3- 3(Toxo14- 3 - 3)信号转导蛋白基因 ,用于寻找弓形虫新的诊断和候选疫苗分子 ,并在寄生虫入侵宿主细胞中寻找分子干预环节。方法　设计合成引物 ,以弓形虫RH株速殖子RNA为模板逆转录合成cDNA链 ,用PCR扩增出弓形虫 14- 3 - 3蛋白编码基因序列 ,克隆入 pGEM -T载体 ,并用双酶切法、以质粒为模板PCR法和DNA测序进行鉴定。结果　Toxo14- 3 - 3具有一个长度为 798bp的完整开放阅读框 ,与GenBank收录 (编号为ABO12 775 )Toxo14- 3 - 3蛋白编码基因一致 ,2个碱基出现密码简并。结论　本实验获得了完全正确的Toxo14- 3 - 3蛋白基因克隆 。

摘要：目的构建针对日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因的RNA干扰的表达载体。方法设计及化学合成日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因的短发夹结构的寡核苷酸,通过退火成双链DNA片段,将其与经限制性内切酶BglⅡ和HindⅢ双酶切的pSUPER质粒连接,构建表达shRNA的重组质粒。结果经酶切及测序证实针对日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因的RNA干扰的表达载体pSUPER构建成功。结论成功构建针对日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因的RNA干扰的表达载体,为进一步研究对日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因RNA干扰作用及该基因功能奠定基础。