摘要：背景：壳聚糖是-种天然的多糖，具有生物降解性、生物相容性及安全无毒等特点，因而成为基因治疗载体研究的热点。目的：将壳聚糖包载含戊型肝炎主要抗原表位基因片段的重组质粒pcHEV23，制备成壳聚糖．pcHEV23纳米粒，并观察其在小鼠体内的免疫增强效果。设计、时间及地点：对比观察实验，于200706／200808在浙江省医学科学院生物工程研究所完成。材料：将等浓度pcHEV23分别与质量浓度为1．4，0．7，0．4，0gm的壳聚糖按1：1体积比混合，复凝聚法制备壳聚糖（高）-pcHEV23、壳聚糖（中）-pcHEVz3、壳聚糖（低）-pcHEV23、空白壳聚糖等4种纳米颗粒。方法：以空质粒pcDNA3、空白壳聚糖纳米粒、质粒pcHEV23为对照组，壳聚糖（高）-pcHEV：3、壳聚糖（中）-pcHEV23、壳聚糖（低）-pcHEV23为实验组，进行免疫小鼠，共免疫3次，每次间隔3周，免疫后2周断尾取血，并于末次断尾采血后进行眼球摘除取血。主要观察指标：检测制备的纳米粒平均粒径、包封率、抵抗核酸酶降解能力；ELISA方法检测免疫小鼠后血清中HEVIgG抗体产生情况；流式细胞仪检测外周血CD4＋、CD8＋T淋巴细胞百分比和CD4＋／CD8＋比值。结果：制备的纳米粒粒径170～470nm，对质粒pcHEV23的包封率均〉95％，能有效抵抗核酸酶降解，起到保护pcHEV23的作用。免疫实验表明壳聚糖-pcHEV23纳米粒可上调小鼠血清HEVkG抗体水平，并显著提高小鼠外周血CD4＋T淋巴细胞百分比及CD4＋／CD8＋比值。结论：壳聚糖能高效装载外源基因pcHEV23，保护其免受核酸酶的降解，有效提高小鼠细胞免疫水平，显示出具有良好的免疫增强作用，作为基因载体具有较大的应用潜力。

摘要：背景:裸DNA在基因治疗中易被体内核酸酶降解。携载DNA疫苗的病毒类载体存在致癌和引发免疫应答等安全问题,且制备方法复杂。非病毒载体(尤其是阳离子-DNA聚合物)具有低毒,低免疫反应,能重复给药,易于大量制备等优点。壳聚糖是一种天然阳离子碱性聚多糖,具有良好的生物可降解性、生物相容性及生物安全性。目的:制备含质粒pHEV23的纳米壳聚糖,观察其表征及对DNA的保护作用。设计、时间及地点:对比观察实验,于2007-06/2008-05在浙江省医学科学院生物工程研究所完成。材料:壳聚糖,脱乙酰度88%,批号061220,由青岛利中甲壳质公司提供。质粒pHEV23为浙江省医学科学院生物工程研究所实验室提供。方法:通过脱水剂Na2SO4诱导的复凝聚沉淀法制备含质粒pHEV23的纳米壳聚糖。根据壳聚糖质量浓度1.4,0.7,0.4g/L,分别制备壳聚糖(高)-pHEV23、壳聚糖(中)-pHEV23、壳聚糖(低)-pHEV23。主要观察指标:激光纳米粒度分析仪测定壳聚糖-pHEV23粒径、Zeta电位;紫外分光光度计检测包封率;凝胶阻滞实验分析壳聚糖和pHEV23的聚合;DNaseⅠ的保护试验分析壳聚糖-pHEV23的抵抗核酸酶降解能力;释放实验评价壳聚糖-pHEV23的稳定性。结果:制备的壳聚糖-pHEV23粒径在170～470nm,其中壳聚糖(低)-pHEV23171.6nm,壳聚糖(中)-pHEV23387.0nm,壳聚糖(高)-pHEV23467.3nm。壳聚糖(低)-pHEV23Zeta电位为+22.9mV。包封率均>95%,其中壳聚糖(低)-pHEV2395.8%,壳聚糖(中)-pHEV2396.7%,壳聚糖(高)-pHEV2397.1%。凝胶阻滞分析表明,壳聚糖和pHEV23之间通过静电作用完全结合,纳米粒带正电荷。DNaseⅠ保护试验表明,壳聚糖-pHEV23能有效抵抗DNaseⅠ酶降解,对pHEV23有保护作用。稳定性试验表明,4℃保存60d,纳米粒仍能较稳定地包裹pHEV23。结论:壳聚糖-pHEV23能高效装载外源DNA,稳定性良好,并保护其免受核酸酶的降解。

摘要：目的建立灵敏、稳定、特异的实时荧光PCR方法,用于戊型肝炎病毒的定量检测。方法采用生物信息学方法,分析比对戊型肝炎病毒全序列,并针对国内流行的戊型肝炎病毒株序列,选择位于ORF2的保守区域设计引物和Taqman探针,建立实时荧光定量PCR方法。并从灵敏度、稳定性及特异性等方面对建立的方法进行综合评价。结果戊型肝炎定量检测的灵敏度为5个目的拷贝,定量的线性范围为5×（100-108）9个数量级。批内重复性检测显示其变异系数为1.49%;批间重复性检测显示其变异系数为1.98%和2.23%。对22份临床标本的检测结果显示具有良好的特异性。结论建立的实时荧光PCR方法具有灵敏度高、稳定性好、特异性强等特点,适用于戊型肝炎病毒的定量检测。

摘要：目的:明确骨髓间充质干细胞移植到关节软骨损伤处后,该处修复组织的细胞来源,以了解组织修复的过程。方法:实验于2006-01/2007-01在浙江省医学科学院生物工程所完成。①实验材料:3月龄新西兰大白兔,清洁级,体质量约2kg,由浙江省实验动物中心提供。②实验方法:利用兔性别决定基因序列设计两对PCR引物。取雄性新西兰大白兔进行骨髓间充质干细胞的分离培养与扩增。取雌性新西兰大白兔,暴露其膝关节软骨,用电钻钻孔造成膝关节软骨内侧直径4.5mm深3.5mm的全层关节软骨缺损,达软骨下骨。一侧植入骨髓间充质干细胞/胶原海绵,另一侧仅植入胶原海绵。③实验评估:于术后1,2,3,4,5个月取兔关节软骨缺损修复处组织提取总DNA,进行PCR扩增,鉴定移植物中是否存在性别决定基因,以明确细胞来源。结果:移植后1,2,3,4,5个月移植雄兔骨髓间充质干细胞及胶原海绵的关节修复处组织提取的DNA,用设计的引物通过PCR扩增出一条约200bp大小的条带,大小与阳性对照一致;而另一侧仅移植胶原海绵的关节软骨修复处组织提取的DNA,用设计的引物通过PCR扩增后未发现有条带。PCR扩增阳性样本测序分析显示,每个样本碱基序列一致,与GenBank上性别决定区Y基因组gb|AY785433.1|比较,扩增的样本序列与标准序列完全一致,序列同源性达100%。结论:雌兔关节骨髓间充质干细胞/胶原海绵复合物移植处的新生组织中含有雄性组织,提示新生软骨中有移植的雄性骨髓间充质干细胞分化来的软骨细胞。

摘要：目的:建立双重实时荧光PCR方法用于流感病毒检测,实现对新甲型H1N1流感病毒,H1和H3亚型季节性流感病毒,H5和H9亚型禽流感病毒的亚型区分。方法:根据GenBank公布的基因序列,针对M基因保守区设计引物和探针,用于流感病毒检测和定量;针对HA基因设计引物和探针,用于病毒分型。建立和优化双重实时荧光PCR反应体系,进行敏感度和特异性评价,同时对32份已知亚型的流感病毒样本进行检测,验证所建方法的实用性。结果:基于M基因的实时荧光PCR方法定量范围为5×101到5×108个目的拷贝。经优化的双重实时荧光PCR方法对不同亚型流感病毒的检测灵敏度在50～500拷贝之间,各亚型之间没有交叉反应。建立的方法能够检测出本研究涉及的所有流感病毒标本,分型准确率达到96.9%。结论:建立的双重实时荧光PCR方法具有敏感度高,特异性好等优点,实现对流感病毒样本准确分型,适用于流感的鉴别诊断及病毒载量测定。

摘要：microRNA(miRNA)作为一种重要的基因表达调控分子,在宿主与病毒相互作用时发挥重要作用。研究发现,宿主感染流感病毒后miRNA表达发生改变,多种miRNA影响流感病毒复制和宿主的抗病毒反应,这类miRNA及其靶点有望成为基因药物和减毒活疫苗研发的重要突破口。除此之外,植物来源的miRNA和主动设计的人工miRNA也体现出抗流感作用。本文就miRNA在抗流感病毒方面的研究进展做一综述。

摘要：目的:建立环介导等温扩增(LAMP)方法用于H9亚型流感病毒基因的检测,为基层实验室提供简便快速的检测方法。方法:根据GenBank中公布的H9亚型流感病毒血凝素基因序列,选择保守区域应用在线软件PrimerExplorer V4设计LAMP引物。以克隆有H9亚型流感病毒血凝素基因的阳性质粒为模板,建立和优化LAMP检测方法,并进行灵敏度、特异性评价和病毒检测。结果:LAMP检测方法对H9亚型流感病毒基因的检出灵敏度达到5个拷贝,比普通PCR方法高出2个数量级,对H1、H3、H5亚型流感病毒不产生非特异性扩增,显示出良好的特异性。结论:建立的LAMP检测方法能快速、敏感、特异地检测H9亚型病毒,适合在基层实验室推广使用。

摘要：目的获得来源于浙江地区鸡组织中的鸡贫血病毒（CAV）筇基因并分析其变异情况。方法根据GenBank登录的vp3序列设计特异引物，利用PCR方法从鸡组织中获得7个CAV的硪，基因克隆，将其克隆到载体进行测序。结果40份鸡血清中共检出CAV阳性16份，阳性率40．0％。序列测定结果表明，叼妇基因长366bp，编码121个氨基酸，与GenBank登录的其他毒株目妒基因的核苷酸序列同源性为97．O％。100．0％，氨基酸序列同源性为95．0％-100．0％。结论通过PCR方法扩增获得了CAVvp3基因，w3基因及VP3蛋白总体上非常保守。

摘要：由奥钢联工程技术公司（ＶＡＩ）提供给芬兰罗德洛基钢铁公司的一台新单流板坯连铸机（６ 号连铸机）于１９９７ 年１２月１５ 日在拉赫厂投产。这一项目和目前正在改造的另两台（４号和５ 号）连铸机，构成了以逐步取代三台前苏联在６０ 年代末期提供的立式连铸机为内容的现代化改造规划的主体。这台铸机配备了ＤＹ－ＮＡＦＬＥＸ液压振动装置，可以在连铸过程中动态调节振动频率、振幅和波形；还配有由１５ 个ＳＭＡＲＴ○Ｒ 扇形段组成的全动态铸流导向系统，借助可靠的液压驱动系统和在线过程控制，连铸机的辊缝以及板坯厚度在１５０～２７０ ｍ ｍ 的设计范围内可以随时改变。